Padronização da metodologia de congelamento de células da granulosa antrais humanas para suporte no co-cultivo com oócitos imaturos (2016)
- Authors:
- Autor USP: MACHADO, MARINA MEIRELLES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGO
- Subjects: ÓVULOS; CRIOPRESERVAÇÃO; CONGELAMENTO
- Keywords: Células da granulosa; Co-cultivo; Co-culture; Congelamento lento; Cryopreservation; Granulosa cells; Maturação folicular; Maturação oocitária; Oocyte maturation; Slow-freezing follicular maturation; Viabilidade; Viability
- Language: Português
- Abstract: As técnicas de cultivo de folículos e oócitos in vitro, com o objetivo de se obter oócitos maduros para procedimentos de Reprodução Assistida (RA), têm sido aplicadas em diferentes contextos. O sucesso destes procedimentos está diretamente relacionado ao sistema de cultivo utilizado. A utilização de células da granulosa (CG) humanas cultivadas in vitro como um suporte para o co-cultivo destes oócitos imaturos e folículos tem sido descrita por alguns autores. A criopreservação destas células, considerando-se o contexto de sua obtenção em procedimentos de RA, permitiria a viabilização da aplicação destas células na prática clínica diária. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi padronizar o congelamento de células da granulosa (CG) humanas para aplicação em sistemas de co-cultivos de folículos e oócitos imaturos. Foram obtidas CG de 20 voluntárias em tratamento de reprodução assistida, células de 10 voluntárias foram cultivadas em meio α-MEM suplementado para interrupção da luteinização e congeladas após 48 horas em container "Cryostep" (grupo 2C- 2 cultivos) (etapa 2) e células de 10 voluntárias foram congeladas em container "Cryostep" sem cultivo prévio (grupo CD- congelamento direto) (etapa 3). Após o descongelamento estas células foram (re)cultivadas por 144 horas, com troca de meio em 48, 96 e 144 horas para avaliações da produção de estradiol (E2) e progesterona (P4) (ng/mL). Verificamos redução na contagem celular e na viabilidade celular tanto no método de congelamento direto (CD) quanto no método com dois cultivos (2C) após o descongelamento (p<0,05), e isso se refletiu na produção de estradiol e progesterona que foi maior nas culturas de células frescas em relação às células criopreservadas (p<0,05). Porém, a relação de E2/célula foi mantida após o descongelamento, sugerindo que esta redução na produção se deve àredução no número de células, as que sobrevivem se mantém normofuncionantes (p=0,23).O CD foi mais eficiente pois permitiu uma maior recuperação celular e uma melhor viabilidade quando comparado ao grupo 2C. A relação estradiol/progesterona foi mantida em todos os tempos de cultivo, fresco, CD e 2C (p>0,05), indicando que a característica funcional destas células foi preservada após o descongelamento. Concluímos que a criopreservação de CG humanas obtidas durante a captação de oócitos compromete a contagem celular e a viabilidade geral da cultura, entretanto, a capacidade funcional e a característica destas células se mantêm preservadas (manutenção das relações E2/célula e E2/P4)
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 05.04.2016
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ABNT
MACHADO, Marina Meirelles. Padronização da metodologia de congelamento de células da granulosa antrais humanas para suporte no co-cultivo com oócitos imaturos. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-27072016-162858/. Acesso em: 04 out. 2024. -
APA
Machado, M. M. (2016). Padronização da metodologia de congelamento de células da granulosa antrais humanas para suporte no co-cultivo com oócitos imaturos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-27072016-162858/ -
NLM
Machado MM. Padronização da metodologia de congelamento de células da granulosa antrais humanas para suporte no co-cultivo com oócitos imaturos [Internet]. 2016 ;[citado 2024 out. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-27072016-162858/ -
Vancouver
Machado MM. Padronização da metodologia de congelamento de células da granulosa antrais humanas para suporte no co-cultivo com oócitos imaturos [Internet]. 2016 ;[citado 2024 out. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-27072016-162858/
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