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Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance (2016)

  • Authors:
  • Autor USP: OLIVEIRA, LUCIANA COUTINHO DE - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: PROTEÍNAS; BIOQUÍMICA; RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR; XANTHOMONAS
  • Language: Inglês
  • Abstract: Bactérias usam sistemas especializados, denominados sistemas de secreção, a fim de translocar substratos para o ambiente ou para outras células, ou até mesmo para capturar moléculas do meio externo. Seis diferentes sistemas de secreção foram descritos em bactérias gram-negativas. O Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS) está envolvido na translocação de fatores de virulência, conjugação bacteriana, absorção e liberação de DNA, e secreção de toxinas antibacterianas. O canal do T4SS (core complex) corresponde a um complexo formado por 14 repetições do heterotrimero VirB7-VirB9-VirB10. A camada externa deste canal é constituída por VirB7 em complexo com os domínios C-terminal de VirB9 (‘VirB9 POT.CT’) e VirB10 (‘VirB10 POT.CT’). Os domínios N-terminal de VirB9 (‘VirB9 POT.NT’) e VirB10 (‘VirB10 POT.NT’) formam a camada interna do core complex. Xanthomonas citri pv. citri (Xac) é uma bactéria gram-negativa que infecta plantas cítricas causando uma doença chamada "cancro cítrico". Embora não esteja diretamente envolvido na infecção, o T4SS cromossomal secreta toxinas capazes de matar outras bactérias gram-negativas. VirB7 de Xac possui uma cauda N-terminal flexível e um domínio globular C-terminal ausente em outras proteínas VirB7. VirB7 interage com ‘VirB9 POT.CT’ através de sua cauda N-terminal. Nesta tese, a estrutura de RMN do complexo formado por ‘VirB9 POT.CT’ e um peptídeo derivado do segmento N-terminal de VirB7 foi resolvida. O complexo é estabilizado, principalmente, por interações hidrofóbicas envolvendo as cadeias laterais de determinados resíduos de aminoácidos, particularmente a Phe30, o Trp34 e a Val37 em VirB7 e a Arg250, a Tyr167 e a Tyr169 em VirB9. A substituição de alguns destes aminoácidos por alanina afeta não só a constante de dissociação do complexo in vitro, como também a atividade e a montagem do T4SS in vivo. Alémdisso, resíduos específicos envolvidos em oligomerização de VirB7 são essenciais para a manutenção de um T4SS funcional, embora não sejam essenciais para a montagem do sistema. Estudos estruturais, de dinâmica e de interações de um fragmento derivado da região rica em prolinas (proline-rich region - PRR) contida no N-terminal de VirB10 (‘VirB10 POT.NT’ - resíduos 85-182) também foram realizados. Medidas de {‘ANTPOT.1 H’}-‘ANTPOT.15 N’ NOE heteronuclear mostraram que ‘VirB10 POT.NT’ é altamente flexível. Análises de deslocamentos químicos e NOEs mostrou que ‘VirB10 POT.NT’ forma uma hélice curta entre os resíduos 151-163. Ensaios de interação por RMN indicaram que esta hélice está envolvida em interações com ‘VirB9 POT.NT’. Estes resultados são a primeira evidência convincente para a especificidade de interação entre os domínios N-terminal de VirB9 e VirB10. Estes dados apontam também para a existência de flexibilidade dentro do T4SS de Xac
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 01.02.2016
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      OLIVEIRA, Luciana Coutinho de; SALINAS, Roberto Kopke. Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance. 2016.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-15092016-084423/ >.
    • APA

      Oliveira, L. C. de, & Salinas, R. K. (2016). Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-15092016-084423/
    • NLM

      Oliveira LC de, Salinas RK. Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-15092016-084423/
    • Vancouver

      Oliveira LC de, Salinas RK. Characterization of structure, dynamics, function and interactions of components from the type IV secretion system of Xanthomonas citri by solution nuclear magnetic resonance [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-15092016-084423/

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