O uso de microRNA para tratamento do câncer de próstata: estudos in vitro e in vivo (2016)
- Authors:
- Autor USP: ISCAIFE, ALEXANDRE - FM
- Unidade: FM
- Sigla do Departamento: MCG
- Subjects: NEOPLASIAS PROSTÁTICAS; METÁSTASE NEOPLÁSICA; TERAPÊUTICA; MODELOS ANIMAIS; MICROANÁLISE; DIAGNÓSTICO POR COMPUTADOR; APOPTOSE; CICLO CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
- Keywords: Animal models; Gene expression; MicroRNAs; Molecular biology; Molecular imaging; Neoplasm metastasis; Prostatic neoplasms; Therapeutics; Transfection
- Language: Português
- Abstract: Introdução: O câncer de próstata (CaP) é o tumor mais comum do homem nos países ocidentais e a segunda causa de óbito por câncer em homens nos EUA, Europa e Brasil. O câncer localizado tem sobrevida câncer especifica elevada quando tratado adequadamente, porém a doença metastática ainda apresenta tratamentos pouco eficientes com sobrevida global de 28%. Os microRNAs (miRNAs) são um grupo de moléculas pequenas de RNA que contém entre 19 a 25 nucleotídeos não codificantes de proteína, com ação fundamental na regulação da expressão gênica. Eles estão envolvidos em processos essenciais nas células normais e neoplásicas como ciclo celular, proliferação, apoptose, metabolismo energético, invasão e metastatização. Objetivos: Realizar estudos in vitro e in vivo usando miRNA em um modelo de câncer de próstata metastático inédito no nosso meio com intuito de analisar o seu potencial como agente terapêutico dessa neoplasia. Métodos: Nos estudos in vitro, três linhagens celulares foram utilizadas (PC3, DU145 e LNCaP). Essas linhagens foram transfectadas com os miRNAs 100, 145 e 373 e seus respectivos antiMiRs utilizando-se lipofectamina. Analisamos a expressão dos genes alvo mTOR, SMARCA5, KRAS, CMYC, MMP9, CD44 por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR). Foram realizados também estudos de apoptose, ciclo celular e ploidia utilizando o citômetro de fluxo. Alterações no potencial de invasão foram avaliadas pela técnica do matrigel. O modelo in vivo pré-clínico foi desenvolvido pelainjeção intra-cardíaca da linhagem PC-3M-Luc-C6 em camundongos NUDE com 9 semanas. O crescimento tumoral foi avaliado com o sistema de bioluminescência in vivo. Após o pleno estabelecimento das metástases no dia 21, os animais foram tratados com três injeções na veia da cauda contendo o miRNA conjugado com o atelocolágeno. Os animais foram sacrificados e no dia 48 para análise dos tecidos. Resultados: miR-100 aumenta a apoptose na LNCaP, e reduz a apoptose na DU145. Na linhagem DU145 o miR 100 inibiu a proliferação. Na análise da expressão gênica o miR-100 inibe SMARCA5 na DU145 e PC3 e mTOR na LNCaP, o anti-miR 100 estimula mTOR e SMARCA5 na LNCaP. O miR-145 promoveu aumento da apoptose em 24% na DU145. Na linhagem PC3 o miR-145 age inibindo a proliferação, com uma diferença absoluta de 18% em relação ao seu controle. O miR-145 inibe KRAS e CMYC nas três linhagens e o anti-miR-145 estimula CMYC na DU145 e RAS nas três linhagens O miR-373 reduziu a apoptose em 29% na DU145 e diminui a proliferação com uma diferença absoluta de 13% em relação ao controle. O miR- 373 estimula a MMP9 na DU145 e na LNCaP e inibe o CD44 na PC3. O antimiR- 373 inibe MMP9 na DU145 e LNCaP. Nos estudos in vivo de CaP metastático o miR-100 apresenta tendência a redução no crescimento tumoral (p=0,23) e o miR-145 reduz o crescimento de forma significativa no dia 34 (p=0,02). Após esses dias o tumor volta a crescer de forma agressiva. Os animais tratados com anti-miR-373 não apresentaram alterações emrelação aos controles. Conclusões: O miR-100 é um miRNA contexto dependente, com papel supressor tumoral em linhagens de tumor de próstata agressivo e o miR- 373 age in vitro como oncomiR. O miR-145 age como supressor tumoral in vitro e em modelo animal de CaP metastático apresentando resposta terapêutica consistente, podendo ser utilizado no arsenal terapêutico contra essa neoplasia. Estudos futuros devem avaliar o uso dos miRNAs isoladamente ou de forma adjuvante no tratamento do CaP metastático
- Imprenta:
- Data da defesa: 10.06.2016
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ABNT
ISCAIFE, Alexandre. O uso de microRNA para tratamento do câncer de próstata: estudos in vitro e in vivo. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-22082016-104926/. Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Iscaife, A. (2016). O uso de microRNA para tratamento do câncer de próstata: estudos in vitro e in vivo (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-22082016-104926/ -
NLM
Iscaife A. O uso de microRNA para tratamento do câncer de próstata: estudos in vitro e in vivo [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-22082016-104926/ -
Vancouver
Iscaife A. O uso de microRNA para tratamento do câncer de próstata: estudos in vitro e in vivo [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5153/tde-22082016-104926/
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