Expressão gênica empregando pseudopartículas em células de mamíferos (HEK 293T e Huh 7.0) cultivadas em diferentes meios de cultura livres de soro (2016)
- Authors:
- Autor USP: PASCHOAL, JULIANA FONTES BELTRAN - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; VIROLOGIA VETERINÁRIA; HIBRIDOMAS; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Adaptação em meios livres de Soro (SFM); Adaptation in serum free media (SFM); Células de mamíferos; Glicoproteína do vírus rábico (RVGP); Glycoprotein of the rabies virus (RVGP); Mammalian cell culture; Pseudopartículas virais; Viral pseudoparticles
- Language: Português
- Abstract: Células HEK293T e Huh7 foram adaptadas em meios livres de soro fetal bovino (SFM). Parâmetros metabólicos e de crescimento foram avaliados, além da expressão gênica heteróloga, utilizando um sistema de expressão que produz pseudo-partículas (ppHCV), derivadas do vírus da Leucemia Murina (MLV) e da Hepatite C (HCV). A adaptação foi realizada através de diluição sequencial para SFM. A linhagem HEK293T foi adaptada em dois SFM: Hybridoma-SFM e CHO-S-SFMII, a linhagem Huh7 foi adaptada nos quatro SFM escolhidos. O consumo de substratos para cada linhagem foi diferente entre os SFM, apesar de o crescimento celular ter sido semelhante. Para a análise da expressão gênica, três vetores foram co-transfectados em células HEK293T. Foi observado que para a produção de ppHCV, o tempo de coleta foi de 48 horas. O método de co-transfecção por lipofectamina produziu mais cópias de vírus, sendo que quantificações de 5,30x103 cópias RNA/µL foram encontradas para vírus produzidos em células adaptadas no meio Hybridoma-SFM através de qRT-PCR. Estas ppHCV foram usadas para infectar células Huh7, células infectadas produziram cerca de 10 ng de proteína recombinante/106 células
- Imprenta:
- Data da defesa: 22.03.2016
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ABNT
PASCHOAL, Juliana Fontes Beltran. Expressão gênica empregando pseudopartículas em células de mamíferos (HEK 293T e Huh 7.0) cultivadas em diferentes meios de cultura livres de soro. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24082016-113658/. Acesso em: 28 mar. 2024. -
APA
Paschoal, J. F. B. (2016). Expressão gênica empregando pseudopartículas em células de mamíferos (HEK 293T e Huh 7.0) cultivadas em diferentes meios de cultura livres de soro (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24082016-113658/ -
NLM
Paschoal JFB. Expressão gênica empregando pseudopartículas em células de mamíferos (HEK 293T e Huh 7.0) cultivadas em diferentes meios de cultura livres de soro [Internet]. 2016 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24082016-113658/ -
Vancouver
Paschoal JFB. Expressão gênica empregando pseudopartículas em células de mamíferos (HEK 293T e Huh 7.0) cultivadas em diferentes meios de cultura livres de soro [Internet]. 2016 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24082016-113658/
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