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Efeito da Laserfototerapia associada ou não à Vitamina C na indução de membranas celulares (cell sheets) de células-tronco da polpa dentária humana (2016)

  • Authors:
  • Autor USP: PEDRONI, ANA CLARA FAGUNDES - FO
  • Unidade: FO
  • Sigla do Departamento: ODD
  • Subjects: MEMBRANAS CELULARES; CÉLULAS-TRONCO; POLPA DENTÁRIA; LASER; VITAMINA C
  • Keywords: Cell Sheet; Cell Sheet; Células-tronco da Polpa Dentária Humana; Human Dental Pulp Stem Cell; Laser; Laser; Laser de Baixa Potência; Low Level Laser; Membrana Celular; Regeneração tecidual; Tissue Regeneration; Vitamin C; Vitamina C
  • Language: Português
  • Abstract: Membranas celulares (MCs; Cell Sheets), constituídas por células-tronco (CTs), são autodestacáveis da placa de cultivo, e sem subcultivos geram grande quantidade de células que podem ser transplantadas de maneira mais próxima da fisiologia celular, mantendo-se as ligações celulares e a matriz extracelular produzidas em cultura. O ácido ascórbico ou vitamina C (VC) tem efeito indutor da formação destas MCs, aumentando a longevidade e tempo de indiferenciação das CTs. A similaridade observada entre respostas biológicas da VC em MCs e aquelas da Laserfototerapia (LFT) sobre células e tecidos, nos levou à hipótese de que estas terapias poderiam se complementar melhorando o prognóstico de futura aplicação clínica dessas MCs em regenerações de tecidos de interesse odontológico. Para testar essa hipótese, LFT e VC foram aplicadas associadas ou não na indução de MCs de células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs). Para tanto, hDPSCs descongeladas, que expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais, foram plaqueadas em placas de 6 poços (5x104 células por poço). Vinte e quatro horas depois do plaqueamento as culturas foram submetidas aos tratamentos dos grupos experimentais: Controle: hDPSCs em P3 cultivadas com meio clonogênico; Senescente: hDPSCs em P27 cultivadas com meio clonogênico; VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultivadas com meio clonogênico e submetido à LFT (contato e pontual - 5 pontos/ poço, 660 nm, 20 mW, 0,028 cm², 0,71 W/cm², 7 segundos, 5 J/cm², 0,14 J por ponto, 48 horas de intervalo) e Laser+VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC e submetido à LFT. Em 24 horas, 7 e 13 dias as hDPSCs dos diferentes grupos experimentais foram observadas macro e microscopicamente, e atividade da enzima telomerase foi avaliada por PCR-TRAP, complementado por ELISA. Para a avaliação da expressão de genes relacionados à natureza e indiferenciação (Mitofilina e Oct 4) e à longevidade (fase catalítica da enzima telomerase - hTERT); bem como à senescência das células do grupo senescente (?-galactosidase), as hDPSCs de todos os grupos experimentais foram submetidas ao RT-qPCR As hDPSCs foram capazes de formar MCs somente nos grupos VC e Laser+VC (100%), entre 10 e 13 dias. As MCs do grupo Laser+VC apresentaram maior facilidade na manipulação. Atividade de Telomerase nas hDPSCs foi observada somente em 24 horas (Controle e LFT) e em 7 dias (VC e Laser+VC). Os marcadores de indiferenciação (Oct 4) e mesenquimal (mitofilina), bem como a hTERT foram expressos nas hDPSCs de todos os grupos experimentais. O Oct4 e o hTERT, em 7 dias, apresentaram expressões significativamente maiores nos grupos VC e Laser+VC em comparação com os demais (p < 0,0001, p = 0,0009, respectivamente). A expressão da mitofilina foi significativamente maior no grupo Laser+VC, em 7 dias (p =0,033). A técnica de obtenção de MCs de hDPSCs por essa metodologia foi considerada adequada para sertestada em procedimentos regenerativos. A LFT quando associada à VC não interferiu na formação das MCs, nem na manutenção da longevidade e indiferenciação das hDPSCs. Adicionalmente, a LFT melhorou a manipulação das MCs. Assim sendo, a associação de VC e LFT na indução de MCs parece promissora para futura utilização de MCs na odontologia regenerativa
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.03.2016
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    • ABNT

      PEDRONI, Ana Clara Fagundes; MARQUES, Marcia Martins. Efeito da Laserfototerapia associada ou não à Vitamina C na indução de membranas celulares (cell sheets) de células-tronco da polpa dentária humana. 2016.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23134/tde-03082016-112215/ >.
    • APA

      Pedroni, A. C. F., & Marques, M. M. (2016). Efeito da Laserfototerapia associada ou não à Vitamina C na indução de membranas celulares (cell sheets) de células-tronco da polpa dentária humana. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23134/tde-03082016-112215/
    • NLM

      Pedroni ACF, Marques MM. Efeito da Laserfototerapia associada ou não à Vitamina C na indução de membranas celulares (cell sheets) de células-tronco da polpa dentária humana [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23134/tde-03082016-112215/
    • Vancouver

      Pedroni ACF, Marques MM. Efeito da Laserfototerapia associada ou não à Vitamina C na indução de membranas celulares (cell sheets) de células-tronco da polpa dentária humana [Internet]. 2016 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23134/tde-03082016-112215/


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