Modulação do trofoblasto bovino na gestação de embriões clonados (2015)
- Authors:
- Autor USP: BARRETO, RODRIGO DA SILVA NUNES - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VCI
- Subjects: BOVINOS (REPRODUÇÃO); REPRODUÇÃO APLICADA ANIMAL; EMBRIOLOGIA ANIMAL
- Keywords: Bovine placenta; DNA methylation; Histone modifications; Metilação do DNA; MHC; MHC; Modificações de histona; Nuclear transfer; Placenta bovina; Transferência nuclear
- Language: Português
- Abstract: O sucesso da gestação, e nascimento da prole saudável, depende da adequada formação, desenvolvimento e funcionamento da placenta. Entretanto, são observadas altas perdas durante o primeiro terço da gestação de embriões bovinos produzidos por transferência de núcleo de célula somática (TNCS), principalmente causadas por alterações placentárias, decorrentes da incompleta reprogramação epigenética no desenvolvimento embrionário. Normalmente, após a fecundação, o DNA paterno é desmetilado durante as primeiras horas do desenvolvimento, enquanto o DNA materno é desmetilado de forma passiva. Entretanto nos embriões TNCS a desmetilação do DNA é tardia e incompleta, resultando numa alteração do padrão epigenético, principalmente nos níveis de metilação (5mC) e hidroximetilação (5hmC) do DNA e nas histonas. Além disso, na gestação TNCS há expressão precoce das moléculas do complexo de histocompatibilidade principal de classe I (MHC-I), associada ao aumento de infiltrados inflamatórios na placenta e à rejeição imunológica ao feto. O objetivo desse trabalho foi de verificar, na placenta bovina TNCS e controle, os níveis globais de 5mC e 5hmC, e de algumas modificações de histonas importantes na formação do trofectoderma ou por serem modificações clássicas, além de imunolocalizar moléculas de MHC-I. Para tanto foram utilizadas amostras de placentônio TNCS no primeiro (n = 5) e terceiro (n = 6) terço gestacional; e como controle, placentônios com controle no primeiro (n = 6) e terceiro (n= 6). Foram realizadas reações de imunohistoquímica para modificações no DNA (5mC, 5hmC) e nas histonas (H3K4me3, H3K27me3, H3K9ac, H3K9me2/3) e para MHC-I (Qa-2 e IL-A88); além de reações de PCR quantitativo para enzimas responsáveis pelas modificações no DNA (DNMT1, TET1, TET3), para alguns genes relacionados com o desenvolvimento da placenta (PAG9, PHDLA2, SNRPN e TSSC4) e para isoformas de MHC-I (NC1-4 e JSP-1). Houve aumento dos níveis globais de metilação, e diminuição de hidroximetilação, na placenta TNCS durante o primeiro trimestre gestacional. Os níveis de H3K4me3 foram estáveis na placenta controle e crescentes na placenta TNCS, enquanto que a H3K27me3 decresceu na placenta controle e foi estável na placenta TNCS. Na placenta TNCS, aos 60 dias, foram observados os menores níveis globais H3K9ac, porém H3K9me2/3 não diferiram entre as idades e tipos gestacionais estudados. Foi identificado MHC-I no trofoblasto do placentônio bovino nas idades analisadas, com variações de intensidade dependendo da isoforma detectada, além de que a placenta controle e a TNCS apresentam padrões diferentes na expressão de MHC-I. De modo geral, o menores níveis de metilação do DNA encontrados na placenta TNCS aos 60 dias de gestação, indica ser um mecanismo compensatório para ativar a expressão gênica. Visto que a as modificações de histona levam a um estado repressivo da expressão gênica, já que a bivalência entre H3K4me3 e H3K27me3 e os níveis de H3K9ac estão diminuídos. Ainda naplacenta TNCS aos 60 dias, há uma alta expressão de MHC-I, levando a resposta imune do sistema materno contra os tecidos fetais. Portanto vários eventos são presentes e parecem contribuir para instabilidade da gestação inicial em clones, coincidindo com a alta taxa de perdas gestacionais nessa fase
- Imprenta:
- Data da defesa: 24.08.2015
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ABNT
BARRETO, Rodrigo da Silva Nunes. Modulação do trofoblasto bovino na gestação de embriões clonados. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-05112015-153853/. Acesso em: 03 nov. 2024. -
APA
Barreto, R. da S. N. (2015). Modulação do trofoblasto bovino na gestação de embriões clonados (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-05112015-153853/ -
NLM
Barreto R da SN. Modulação do trofoblasto bovino na gestação de embriões clonados [Internet]. 2015 ;[citado 2024 nov. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-05112015-153853/ -
Vancouver
Barreto R da SN. Modulação do trofoblasto bovino na gestação de embriões clonados [Internet]. 2015 ;[citado 2024 nov. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-05112015-153853/ - Ocorrência e mecanismos do microquimerismo fetal em gestações bovinas
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