Mecanismos envolvidos na modulação da expressão, tráfego intracelular e exocitose de proteínas da superfície celular por Nef do HIV-1 (2015)
- Authors:
- Autor USP: CARVALHO, JULIANNE VARGAS DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: HIV; PROTEÍNAS; EXOCITOSE
- Language: Português
- Abstract: O HIV-1 desenvolveu estratégias para evitar sua detecção e destruição por células do sistema imune do hospedeiro. Nef é uma proteína acessória do HIV-1 envolvida em vários processos de evasão do sistema imune e que tem papel importante na progressão da AIDS. Dentre suas funções, Nef é capaz de reduzir a expressão de proteínas da superfície celular, como CD4 e MHC-I. A diminuição de MHC-I previne o reconhecimento e destruição de células infectadas por linfócitos T citotóxicos. Nef altera o tráfego intracelular de moléculas de MHC-I, resultando no direcionamento dessas proteínas para degradação em lisossomos. Apesar dos efeitos de Nef sobre a distribuição de moléculas de MHC-I serem bem documentados, os mecanismos utilizados por Nef para induzir este redirecionamento são pouco conhecidos. O objetivo geral deste estudo foi entender melhor esses mecanismos, identificando fatores celulares utilizados por Nef para alterar o tráfego de MHC-I (HLA-A2). Para monitorar a regulação negativa de HLA-A2 por Nef, utilizou-se células HeLa que expressam constitutivamente HLA-A2. Por citometria de fluxo confirmou-se que Nef diminui a expressão na superfície de HLA-A2 e por microscopia confocal foi mostrado que este fator viral causa redistribuição destas moléculas para o TGN e endossomos. Para melhor entender as similaridades entre a regulação negativa de CD4 e HLA-A2, foi comparada a distribuição destas proteínas em células expressando Nef e encontrou-se co-localização destas em endossomos. Após tratamento com inibidor da atividade lisossomal (bafilomicina A1) observou-se aumento desta co-localização em endossomos. Foi mostrado também que a expressão de Nef induziu a degradação de HLA-A2 e CD4 em lisossomos e o tratamento com bafilomicina A1 inibiu a redução dos níveis totais destas proteínas em linfócitos T CD4+ de uma maneira tempo-dependente. Posteriormente, foi testado, em células HeLa HLA-A2, se odirecionamento de MHC-I para lisossomos por Nef requer a atividade da maquinaria ESCRT (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport). Verificou-se que a super-expressão da proteína HRS (ESCRT-0) ou de um mutante da AAA ATPase VPS4p (VPS4 E/Q), em células co-expressando Nef, leva a acumulação de HLA-A2 em endossomos de dimensões aumentadas, contendo HRS ou VPS4 E/Q. Esses dados indicam que Nef direciona MHC-I para via dos corpos multivesiculares (MVBs) de maneira dependente da maquinaria ESCRT, como já descrito para CD4. É relatado também que Nef utiliza a proteína adaptadora heterotetramérica AP-1 para alterar o tráfego de MHC-I. Neste estudo foi verificado e comparado o envolvimento de duas isoformas da subunidade γ de AP-1 (γ-2 e γ-1) na regulação negativa de HLA-A2 por Nef. Análises de microscopia confocal e citometria de fluxo mostraram que a subunidade γ-1 adaptina, mas não γ-2, é requerida para uma eficiente regulação negativa de HLA-A2 por Nef. Outra função de Nef é na rota secretória, aumentando a liberação de vesículas extracelulares (exossomos). Para melhor entender os efeitos de Nef nesta via exocítica, foi investigado se este fator viral modifica a composição de exossomos liberados por linfócitos e se Nef utiliza desta via no processo de regulação negativa de HLA-A2 e CD4. Para isso, estas vesículas extracelulares foram isoladas e caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura, transmissão e western blot como sendo exossomos. Os resultados mostraram que CD4 e HLA-A2 são secretadas nestes exossomos e que a expressão de Nef reduziu a quantidade destas moléculas nestas vesículas. Com esses dados, conclui-se que Nef modifica a composição de exossomos e não utiliza da via exocítica como uma forma de reduzir a expressão celular de CD4 e HLA-A2.A identificação dos mecanismos que levam à regulação negativa de receptores por Nef resultará em um melhor entendimento das ações deste fator viral na sua contribuição para a progressão da AIDS
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2015
- Data da defesa: 28.09.2015
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ABNT
CARVALHO, Julianne Vargas. Mecanismos envolvidos na modulação da expressão, tráfego intracelular e exocitose de proteínas da superfície celular por Nef do HIV-1. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. . Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Carvalho, J. V. (2015). Mecanismos envolvidos na modulação da expressão, tráfego intracelular e exocitose de proteínas da superfície celular por Nef do HIV-1 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Carvalho JV. Mecanismos envolvidos na modulação da expressão, tráfego intracelular e exocitose de proteínas da superfície celular por Nef do HIV-1. 2015 ;[citado 2025 dez. 27 ] -
Vancouver
Carvalho JV. Mecanismos envolvidos na modulação da expressão, tráfego intracelular e exocitose de proteínas da superfície celular por Nef do HIV-1. 2015 ;[citado 2025 dez. 27 ]
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