Silenciamento gênico via RNAi visando o controle da broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) (2015)
- Authors:
- Autor USP: BARDELLA, DANIELA ZARDINI - CENA
- Unidade: CENA
- Subjects: BIOTECNOLOGIA; BROCAS (INSETOS NOCIVOS); ENTOMOLOGIA AGRÍCOLA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Controle de pragas; Gene silencing; Pest control; RNA de interferência; RNA interference; Silenciamento gênico; Transcriptome; Transcritoma
- Language: Português
- Abstract: A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma importante cultura na produção de alimentos e energia. Várias espécies de insetos podem causar sérios prejuízos econômicos à cultura da cana-de-açúcar. A broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) é a praga de maior relevância por estar amplamente distribuída nas regiões canavieiras. O silenciamento gênico por RNA de interferência (RNAi) se tornou uma técnica amplamente estudada e utilizada nos mais diversos aspectos da biologia. Uma de suas aplicações é no controle de insetos-praga como uma alternativa de alta eficiência, especificidade e reduzido impacto ambiental. A ingestão de moléculas de RNA dupla fita (dsRNA) com identidade a regiões de genes essenciais de insetos-praga pode resultar no silenciamento destes genes, levando a fenótipos deficientes. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo buscar genes alvos para o silenciamento com potencial para impedir o desenvolvimento normal da D. saccharalis e estabelecer uma forma de entrega do dsRNA eficiente para o teste de genes, visando assim validar o uso da técnica para a espécie. Por meio da clonagem de regiões de genes ortólogos já utilizados como alvo de silencimento em outras espécies de insetos (V-ATPase A, Receptor de Ecdisona e Arginina Kinase), e de genes com função específica identificadas após a caracterização do transcritoma de D. saccharalis (Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase, Neverland e Quitina Sintase) foram conduzidos ensaios de RNAi. Foram realizadosensaios de dose resposta para o gene V-ATPaseem lagartas neonatas, onde a concentração selecionada por causar melhor redução na expressão do gene alvo foi de 2,5 µg µL-1. Esta concentração foi então utilizada em ensaios de alimentação para os outros genes. Os genes V-ATPase A, receptor de Ecdisona, Arginina Kinase, Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase e Quitina Sintase apresentaram redução significativa no número de transcritos em larvas, demonstrando a viabilidade do uso de RNAi em D. saccharalisneonatas. O gene Neverland não demonstrou redução no acúmulo de transcritos nas condições trabalhadas. O gene GFP inicialmente utilizado como controle negativo apresentou variação na expressão de genes alvo, sendo desconsiderado como bom controle para D. saccharalis. O silenciamento dos genes alvo requer quantidades elevadas de dsRNA, superiores aos obtidos por transcrição in vitro, o que limita a viabilidade de ensaios com maiores replicatas e para determinar efeitos biológico. Alternativas de produção de dsRNA devem ser avaliadas para viabilizar a seleção de genes alvo efetivos
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2015
- Data da defesa: 13.11.2015
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ABNT
BARDELLA, Daniela Zardini. Silenciamento gênico via RNAi visando o controle da broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis). 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/64/64133/tde-01022016-172023/. Acesso em: 28 fev. 2026. -
APA
Bardella, D. Z. (2015). Silenciamento gênico via RNAi visando o controle da broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/64/64133/tde-01022016-172023/ -
NLM
Bardella DZ. Silenciamento gênico via RNAi visando o controle da broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) [Internet]. 2015 ;[citado 2026 fev. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/64/64133/tde-01022016-172023/ -
Vancouver
Bardella DZ. Silenciamento gênico via RNAi visando o controle da broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis) [Internet]. 2015 ;[citado 2026 fev. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/64/64133/tde-01022016-172023/
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