A VAPB e a Esclerose Lateral Amiotrófica (2015)
- Authors:
- Autor USP: BECCARI, MELINDA SANTOS - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Subjects: ESCLEROSE AMIOTRÓFICA LATERAL; DOENÇAS NEURODEGENERATIVAS; MUTAÇÃO GENÉTICA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Amyotrophic Lateral Sclerosis; LC-MS/MS; LC-MS/MS; PCR em tempo real; Real-time PCR; VAPB; VAPB
- Language: Português
- Abstract: A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é uma doença crônica, progressiva e neurodegenerativa causada pela morte dos neurônios motores. O diagnóstico destes pacientes pode levar até 12 meses para acontecer, sendo que estes vão à óbito entre 3-5 anos do início dos sintomas. Há, porém, grande variabilidade de quadro clínico, com alguns pacientes falecendo com menos de 1 ano do início dos primeiros sinais, e outros que sobrevivem por décadas. A identificação da ELA8, causada por uma mutação missense no gene VAPB (c.C166T, p.P56S), tem contribuído significativamente com o conhecimento dos mecanismos moleculares por trás da ELA. A literatura recente tem evidenciado que a diminuição dos níveis de VAPB está presente em modelos celulares e murinos da doença, e também em amostras de pacientes, sugerindo que esta proteína teria papel central na doença e uma contribuição significativa para a morte dos neurônios motores. O presente trabalho buscou três objetivos principais: (1) o diagnóstico molecular através de um painel de sequenciamento de nova geração que inclui os genes SOD1, FUS, TARDBP, SETX, SPG11, FIG4 e VAPB; (2) a avaliação dos níveis de RNAm de VAPA, VAPB e EPHA4 em pacientes de ELA8, controles familiares e outros pacientes de ELA, com o intuito de investigar possíveis papéis destes genes na doença; e por fim, (3) o desenvolvimento de um ensaio quantitativo para as proteínas VAPA, VAPB e VAPC baseado em cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem(LC-MS/MS), para a posterior avaliação de VAPB como possível biomarcador em ELA, e de suas isoformas VAPA e VAPC como modificadores da doença. Para a análise genômica, foram avaliados 67 pacientes, sendo que 31 (ou 46%) apresentaram a mutação c.C166T em VAPB; 4 pacientes (6%) em SOD1, sendo que um destes apresentou uma mutação também em FIG4; 1 paciente (1.5%) foi identificado uma mutação patogênica em FUS; outro, duas mutações deletérias em trans em SPG11. Os níveis de RNAm de VAPB, VAPA e EPHA4 não são estatisticamente distintos entre pacientes e controles; porém, os níveis de EPHA4 estavam significativamente elevados em dois pacientes de início bulbar da doença. Para o desenvolvimento do método quantitativo por LC-MS/MS, foram escolhidos 8 peptídeos inequívocos para análise, estabelecidos dos parâmetros de corrida, e desenvolvidos dois padrões internos (linhagens SILAC e VAPB recombinante) para a quantificação. Esta ferramenta desenvolvida poderá auxiliar não apenas os estudos moleculares que envolvem os mecanismos por trás ELA8, responsável por uma elevada taxa dos casos familiais brasileiros, mas também poderá determinar o potencial de VAPB como biomarcador para Esclerose Lateral Amiotrófica
- Imprenta:
- Data da defesa: 23.09.2015
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ABNT
BECCARI, Melinda Santos. A VAPB e a Esclerose Lateral Amiotrófica. 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012016-155440/. Acesso em: 23 jan. 2026. -
APA
Beccari, M. S. (2015). A VAPB e a Esclerose Lateral Amiotrófica (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012016-155440/ -
NLM
Beccari MS. A VAPB e a Esclerose Lateral Amiotrófica [Internet]. 2015 ;[citado 2026 jan. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012016-155440/ -
Vancouver
Beccari MS. A VAPB e a Esclerose Lateral Amiotrófica [Internet]. 2015 ;[citado 2026 jan. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012016-155440/
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