Proteínas ASF1 (Anti Silencing Factor 1) de Leishmania major (2015)
- Authors:
- Autor USP: GARCIA, JULIANA BORIO FERREIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: LEISHMANIA; DNA (REPARAÇÃO); CROMATINA
- Language: Português
- Abstract: Os mecanismos e os genes envolvidos na remodelagem da cromatina em tripanossomatídeos têm sido objeto de intensa investigação nos últimos anos. Envolvida nesse processo e caracterizada em diferentes organismos, a ASF1 (Anti-Silencing Factor 1) foi identificada como uma chaperona de histonas que contribui para a deposição destas durante a montagem dos nucleossomos em DNA recém-replicado. Esta proteína também está envolvida na resposta celular a danos ao DNA e silenciamento transcricional. Identificamos em nosso laboratório uma ASF1-símile em Leishmania major e estudos funcionais indicam que também nos tripanossomatídeos a ASF1 está envolvida no empacotamento da cromatina e na preservação da integridade do DNA. Resultados recentes obtidos em nosso laboratório mostraram que níveis aumentados desta proteína não têm qualquer influência na expressão de genes teloméricos e a superexpressão de ASF1 a revelou níveis aumentados de proteínas envolvidas na montagem da cromatina. Além disso, também foi possível observar o envolvimento de ASF1 com a resposta celular ao dano de DNA. Para investigar os mecanismos de ação desta proteína relacionados ao reparo de DNA submetemos células modificadas de Leishmania major e Trypanosoma cruzi que superexpressam ASF1a a diferentes agentes genotóxicos (peróxido de hidrogénio, metil metano sulfonato, irradiação gama) e foi possível observar que estes tripanossomatídeos possuem respostas celulares diferentes para cada tipo de dano ao DNA. O perfil proteômico dos mutantes - controle e superexpressor de ASF1a em L. major - quando tratados com 400 μm de H2O2 por 6 horas, foi analisado. Verificou-se 40 proteínas diferencialmente expressas, que foram identificadas por espectrometria de massa. A anotação funcional das proteínas foi realizada para melhor caracterização destas e para obter algumas informações sobre as 12 proteínas identificadas comohipotéticas. Foi possível a identificação de uma quinase associada a fase S (LmjF.11.1210) up-regulada no superexpressor de ASF1a. Como outros eucariotos, os tripanossomatídeos possuem dois genes que codificam os parálogos ASF1a e ASF1b e suas funções específicas ainda não são conhecidas. Foi possível observar que os parálogos de ASF1 em L. major possuem divergência de sequência entre si e assim passamos a compará-las. A localização subcelular de ASF1a mostrou-se preferencialmente citoplasmática, em contrapartida ASF1b, assim como para os demais eucariotos, encontra-se preferencialmente no núcleo do parasito. Nossos dados também indicam que os superexpressores de ASF1a e ASF1b interferem na resposta ao dano no DNA por influenciar o arraste no ciclo celular. Experimentas de co-imunoprecipitaçao com ASF1a identificaram, entre outras, a Histona H3. No entanto, não detectamos, por Western Bloffing, diferenças nos níveis de H3 e H3 acetilada nas linhagens selvagem e superexpressora de ASF1a. Ao descrever as características singulares de ASF1 em L. major apontamos as diferenças funcionais de ASF1 em relação a outros organismos e entre e seus parálogos encontrados também neste parasito. Além disso, neste trabalho foi possível demonstrar as diferenças entre as respostas ao estresse e dano ao DNA de T. cruzi e L. major que parecem envolver diferenças na maquinaria de reparo e controle do ciclo celular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2015
- Data da defesa: 28.05.2015
-
ABNT
GARCIA, Juliana Bório Ferreira. Proteínas ASF1 (Anti Silencing Factor 1) de Leishmania major. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. . Acesso em: 04 ago. 2024. -
APA
Garcia, J. B. F. (2015). Proteínas ASF1 (Anti Silencing Factor 1) de Leishmania major (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Garcia JBF. Proteínas ASF1 (Anti Silencing Factor 1) de Leishmania major. 2015 ;[citado 2024 ago. 04 ] -
Vancouver
Garcia JBF. Proteínas ASF1 (Anti Silencing Factor 1) de Leishmania major. 2015 ;[citado 2024 ago. 04 ]
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
