Estudo da dinâmica funcional dos domínios regulatórios do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster por resonância magnética nuclear em solução (2015)
- Authors:
- Autor USP: ABIKO, LAYARA AKEMI - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QFL
- Subjects: ESPECTROSCOPIA DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR; DROSOPHILA
- Language: Português
- Abstract: O trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ (NCX) constitui um dos principais mecanismos de extrusão de ‘CaPOT.2+´ intracelular em células excitáveis. Foi demonstrado que alterações no funcionamento do NCX estão relacionadas a diversas situações patológicas. Por este motivo, o entendimento do mecanismo molecular da manutenção da concentração de ‘CaPOT.2+´ intracelular via NCX é importante para a compreensão do funcionamento do trocador, bem como para o desenvolvimento de fármacos. Além de transportar ‘NaPOT.+´e ’CaPOT.2+´, o NCX também é regulado por esses íons. Este trocador é composto por dois domínios transmembranares, cada um deles contendo 5 α-hélices (TM), e uma grande alça intracelular que conecta as hélices TM5 e TM6. O domínio transmembranar é responsável por catalisar o transporte de ‘NaPOT.+´e ’CaPOT.2+´ através da bicamada lipídica, enquanto que a alça citoplasmática está envolvida com a regulação do trocador. Esta alça contém dois domínios sensores de ‘CaPOT.2+´ adjacentes, denominados CBD1 e CBD2. Apesar da importância fisiológica do NCX, o mecanismo de regulação alostérica do trocador por ‘CaPOT.2+´ intracelular permanece desconhecido. Neste trabalho, a espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de alta resolução foi utilizada para investigar a conformação e a dinâmica de CBD1 e CBD2 do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster (CALX), isolados ou conectados covalentemente em uma construção denominada CBD12. Um total de 98% das ressonâncias da cadeia principal de CBD1 isolado na presença de ‘CaPOT.2+´ foi assinalado, enquanto que na ausência de ‘CaPOT.2+´, assinalamentos para apenas uma parte da cadeia principal puderam ser obtidos. Os assinalamentos adquiridos para CBD12 foram baseados na análise de um conjunto de espectros de RMN tridimensional heteronuclear e por comparação comos espectros dos domínios isolados. Uma análise preliminar dos deslocamentos químicos e dos parâmetros de relaxação de ´ANTIPOT.15N´ obtidos para CBD1 indicou que este domínio é flexível na ausência de ‘CaPOT.2+´, mas torna-se rígido após a adição deste íon. As medidas das velocidades de relaxação de´ANTIPOT.15N´ e de acoplamentos dipolares residuais (RDCs) de ‘ANTIPOT1H´-´ANTIPOT.15N´ realizadas para CBD12 nas formas apo e holo indicaram que a ligação de ‘CaPOT.2+´ em CBD1 estabiliza uma orientação rígida entre os domínios. A análise dos RDCs de ‘ANTIPOT1H´-´ANTIPOT.15N´ mostrou ainda que a orientação média entre CBD1 e CBD2 é praticamente linear na ausência de ‘CaPOT.2+´, enquanto que um ângulo menor é assumido após a adição deste íon. Os dados descritos nesta tese suportam um modelo de regulação alostérica em que a modulação da plasticidade de CBD12 pela ligação de ‘CaPOT.2+´ no domínio CBD1 controla a abertura e o fechamento do trocador
- Imprenta:
- Data da defesa: 20.03.2015
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ABNT
ABIKO, Layara Akemi. Estudo da dinâmica funcional dos domínios regulatórios do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster por resonância magnética nuclear em solução. 2015. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-20072015-115123/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Abiko, L. A. (2015). Estudo da dinâmica funcional dos domínios regulatórios do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster por resonância magnética nuclear em solução (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-20072015-115123/ -
NLM
Abiko LA. Estudo da dinâmica funcional dos domínios regulatórios do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster por resonância magnética nuclear em solução [Internet]. 2015 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-20072015-115123/ -
Vancouver
Abiko LA. Estudo da dinâmica funcional dos domínios regulatórios do trocador de ‘NaPOT.+´/’CaPOT.2+´ de Drosophila melanogaster por resonância magnética nuclear em solução [Internet]. 2015 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-20072015-115123/
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