Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para Alphavirus e Flavivirus (2014)
- Authors:
- Autor USP: ROMEIRO, MARILIA FARIGNOLI - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: ARBOVÍRUS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; DIAGNÓSTICO
- Language: Português
- Abstract: Os arbovírus dos gêneros Flavivirus (Flaviviridae) e Alphavirus (Togaviridae) são causa de graves problemas de saúde pública em países tropicais e subtropicais. Estas arboviroses, geralmente são sub-diagnosticadas por falta de métodos laboratoriais adequados. O presente estudo objetivou o desenvolvimento de RT-PCRs em tempo real para detectar genomas de Flavivirus e Alphavirus, utilizando, para tanto, o SYBR Green. Para a padronização destas RT-PCRs foram escolhidos primers gênero-específicos e realizadas comparações com diferentes concentrações dos primers, volumes das amostras em teste, dos reagentes e temperaturas das reações. Também, visando a testes quantitativos, clonaram-se partes dos genes das proteínas NS5 para Flavivirus e da nsP1 para Alphavirus em plasmídeo e estes foram utilizados para transformar Escherichia coli cepa Dh5-α. Após a clonagem dos produtos, foram desenvolvidas as curvas-padrão de Flavivirus e Alphavirus, e determinada a sensibilidade dos testes (Flavivirus - 100 cópias de RNA/mL e Alphavirus- 10 cópias de RNA/mL). Após a padronização, testaram-se 410 soros humanos de pacientes com suspeita de dengue e 19 lotes de carrapatos. Observaram-se 3 soros positivos para dengue-1, 13 para dengue-3 e 1 para dengue-4. Portanto, acreditamos que as técnicas desenvolvidas neste estudo serão de grande valia para o diagnóstico de pacientes e para estudos sobre a epidemiologia dos Alphavirus e Flavivirus que ocorrem no Brasil.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 28.11.2014
-
ABNT
ROMEIRO, Marilia Farignoli. Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para Alphavirus e Flavivirus. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Romeiro, M. F. (2014). Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para Alphavirus e Flavivirus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Romeiro MF. Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para Alphavirus e Flavivirus. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Romeiro MF. Desenvolvimento de RT-PCR em tempo real para Alphavirus e Flavivirus. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ] - Estudo sobre infecções por Alphavirus e Flavivirus em amostras de banco de sangue
- Development of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies targeting recombinant envelope protein 2 of Mayaro virus
- Serological evidence of Mayaro virus infection in blood donors from São Carlos, São Paulo, Brazil
- Whole-genome sequencing of parvoviruses from wild and domestic animals in Brazil provides new insights into parvovirus distribution and diversity
- Enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant envelope protein 2 antigen for diagnosis of Chikungunya virus
- Discovery of novel anelloviruses and small mammals expands the host range and diversity of the Anelloviridae
- Novel parvoviruses from wild and domestic animals in Brazil provide new insights into parvovirus distribution and diversity
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