Obtenção das quinases dependentes de ciclinas CDK9 e CDK11 humanas utilizando um sistema bacteriano de expressão (E. coli) (2015)
- Authors:
- Autor USP: SANTOS, NÍKOLAS PAPARIDIS FERREIRA DOS - IQSC
- Unidade: IQSC
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; ESCHERICHIA COLI
- Language: Português
- Abstract: As CDKs 9 e 11 fazem parte da subfamília de CDKs transcricionais, e portanto desempenham papéis de controle na dinâmica atividade de síntese e processamento do RNA mensageiro pela RNA Polimerase II. Devido à sua capacidade de modular individualmente a atividade dos complexos de transcrição da RNAP II, estas quinases assumem uma grande importância para a regulação da expressão gênica em células eucarióticas. Casos de desregulação da atividade das CDKs transcricionais têm sido frequentemente relacionados a diversas patologias humanas graves, incluindo vários tipos de câncer e também a AIDS (em razão do papel essencial desempenhado pela CDK9 na replicação do HIV). O objetivo deste trabalho é a obtenção das CDKs humanas 9 e 11, através da sua expressão heteróloga em um sistema bacteriano (Escherichia coli). A utilização de um sistema bacteriano oferece muitas vantagens, como a simplicidade técnica, baixo custo, altos níveis de expressão, e elevado rendimento na purificação do produtoNo entanto, a obtenção de quinases humanas ativas a partir de E. coli sempre representou um desafio prático, devido aos problemas classicamente associados à expressão heteróloga. Os resultados apresentados aqui demonstram a possibilidade de se obter a CDK9 humana enzimaticamente ativa pelo reenovelamento in vitro da proteína expressa pela bactéria na forma de corpos de inclusão, após ser solubilizada e purificada em condições desnaturantes. A CDK11 humana, por outro lado, só pôde ser obtida em uma versão encurtada, consistindo apenas no seu domínio quinase, devido à forte inibição que um trecho N-terminal da sequência mostrou exercer sobre a expressão da proteína. Assim, este trabalho fornece exemplos de como é possível superar algumas das adversidades comuns da expressão heteróloga a fim de se obter CDKs humanas ativas empregando o sistema bacteriano
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2015
- Data da defesa: 17.04.2015
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ABNT
SANTOS, Nikolas Paparidis Ferreira dos. Obtenção das quinases dependentes de ciclinas CDK9 e CDK11 humanas utilizando um sistema bacteriano de expressão (E. coli). 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-16062015-091524/. Acesso em: 30 set. 2024. -
APA
Santos, N. P. F. dos. (2015). Obtenção das quinases dependentes de ciclinas CDK9 e CDK11 humanas utilizando um sistema bacteriano de expressão (E. coli) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-16062015-091524/ -
NLM
Santos NPF dos. Obtenção das quinases dependentes de ciclinas CDK9 e CDK11 humanas utilizando um sistema bacteriano de expressão (E. coli) [Internet]. 2015 ;[citado 2024 set. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-16062015-091524/ -
Vancouver
Santos NPF dos. Obtenção das quinases dependentes de ciclinas CDK9 e CDK11 humanas utilizando um sistema bacteriano de expressão (E. coli) [Internet]. 2015 ;[citado 2024 set. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-16062015-091524/
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