Clonagem, expressão e caracterização do fator estimulador de colónia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli (2014)
- Authors:
- Autor USP: CARMO, FILLIPE LUIZ ROSA DO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 604
- Subjects: PROTEÍNAS RECOMBINANTES; GRANULÓCITOS; CLONAGEM; ESCHERICHIA COLI
- Keywords: BL21DE3; Expressão heteróloga; Filgrastima; G-CSF; rhG-CSF; Sistema procarioto; Prokaryotic system; Recombinant protein
- Language: Português
- Abstract: O sistema de expressão em Escherichia coli foi o primeiro a ser utilizado para produzir produtos farmacêuticos recombinantes e tem muitas vantagens quando comparado com sistemas eucarióticos, como o fácil cultivo, baixo custo e alto potencial de produção. O fator estimulador de colónias de granulócito (G-CSF) atua principalmente promovendo a maturação dos neutrófilos e estimulando sua atividade fagocítica e quimiotática, além de estar envolvido com o processo de segmentação nuclear dessas células. O fator estimulador de colónias de granulócitos humano recombinante (rhG-CSF) tem sido produzido por engenharia genética em Eschenchia coli, e é usado no tratamento de diversas patologias, sobretudo em neutropenias provocadas pela quimioterapia usada no tratamento de tumores, pela radioterapia e pelo uso de drogas que suprimem a produção de células mielóides. Desse modo, o presente estudo teve como objetivo a expressão da proteína rhG-CSF em bactérias Escherichia coli. A clonagem do gene rhG-CSF no vetar de expressão pET-28a(+) foi realizada nos sítios de restrição das enzimas EcoRI e Xhol, e a expressão da proteína recombinante em cepas de bactéria Escherichia coli BL21DE3 foi obtida com sucesso. A proteína rhG-CSF, fundida à cauda de seis histidinas, foi purificada com êxito e identificada pelas técnicas de Westem Bloffing e por espectrometria de massas. São necessários estudos para avaliar a integridade estrutural e atividade biológica da proteína produzida, que se confirmada, possibilita que esta seja produzida em escala piloto
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 03.09.2014
-
ABNT
CARMO, Fillipe Luiz Rosa do. Clonagem, expressão e caracterização do fator estimulador de colónia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-112052/. Acesso em: 25 set. 2024. -
APA
Carmo, F. L. R. do. (2014). Clonagem, expressão e caracterização do fator estimulador de colónia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-112052/ -
NLM
Carmo FLR do. Clonagem, expressão e caracterização do fator estimulador de colónia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli [Internet]. 2014 ;[citado 2024 set. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-112052/ -
Vancouver
Carmo FLR do. Clonagem, expressão e caracterização do fator estimulador de colónia de granulócito humano recombinante (rhG-CSF) em Escherichia coli [Internet]. 2014 ;[citado 2024 set. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-112052/
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