Produção, liofilização, purificação e determinação de especificidade da peptidase isolada do fungo Scopulariopsis koningii (2014)
- Authors:
- Autor USP: GIOVANINI, GABRIEL TESCAROLO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: BIOTECNOLOGIA; ENZIMOLOGIA; LIOFILIZAÇÃO; BIOPROCESSOS
- Keywords: bioprocesses; bioprocessos; biotechnology; biotecnologia; enzimologia; enzymology; liofilização; lyophilization; peptidase; peptidase
- Language: Português
- Abstract: Peptidase pode ser considerada, como uma subclasse das enzimas hidrolíticas que ocupam uma posição central em relação às suas aplicações na área fisiológica e também na área comercial. As peptidases representam um dos três maiores grupos de enzimas industriais e são responsáveis por cerca de 60% da venda mundial de enzimas. O presente trabalho visa avaliar a produção de peptidase em fermentação submersa (FSm) pelo fungo Scopulariopsis koningii, utilizando como substrato farinha de pena (FP), a caracterização bioquímica parcial, secagem do extrato bruto, purificação da peptidase e determinação de especificidade da peptidase isolada. Para avaliar a influência da farinha de pena (FP), na produção de peptidases, foram adicionadas às porcentagens de 0,2; 0,4 e 0,8% no meio de cultura. Os melhores níveis de produção de peptidases pelo fungo Scopulariopsis koningii foram obtidos nas concentrações de 0,4% e 0,8% de FP em 48h de fermentação com 1.427 U/mL. A caracterização bioquímica parcial do extrato bruto foi realizada com azocaseína 1% preparada em tampão com pH adequado. A peptidase presente no extrato enzimático apresentou atividade ótima em pH 6,5 e temperatura ótima de 55°C. A peptidase foi inibida por PMSF, indicando a presença de resíduo de aminoácido serino no sítio catalítco, e desta forma sendo classificada como serino peptidase. Entretanto, também observamos uma inibição por EDTA, sugerindo a presença de uma metalo peptidase presente no extrato bruto, desta formapodemos sugerir que o fungo S. koningii na presença do meio contendo FP secreta duas subclasses; serino e metalo peptidase, ou secreta uma serino peptidase dependente de íon. Zimograma constatou a presença de duas enzimas. A atividade enzimática do extrato bruto diminuiu significativamente quando exposta os íons Al+3, Ni2+ e Cu2+ e aumentada quando adicionados os íons Ba2+, Ca2+ e Mg2+. A purificação da metalo peptidase presente no extrato enzimático envolveu sete etapas de purificação, sendo cromatografia de troca-iônica e gel filtração determinantes, com recuperação de 6% e purificação de 3,4 vezes. Utilizando a peptidase pura (metalo) realizouse a caracterização bioquímica funcional e a determinação dos parâmetros cinéticos, ambos utilizando o substrato peptídico de supressão intramolecular de fluorescência. A peptidase pura apresentou atividade ótima em pH 6,0 e temperatura ótima de 40°C e mostrou-se estável em ampla faixa de pH e temperatura. Foi modulada positivamente pelos íons Na+ e K+ e negativamente por Al3+ e Cu2+. A análise dos parâmetros cinéticos revelou uma grande influência de aminoácidos apolares do lado \"linha\" do substrato sintético na eficiência catalítica e no lado não \"linha\" grande influência de aminoácidos polares neutros e apolares. A secagem foi realizada por liofilização foram utilizados três tipos de adjuvantes: maltodextrina, manitol e glicina, em diferentes concentrações. Após a secagem foi realizado estudo da estabilidade nas temperaturas4, 25 e 60°C por 32 dias para avaliar o desempenho dos adjuvantes na manutenção da atividade do extrato enzimático liofilizado. O adjuvante considerado mais eficaz foi a maltodextrina na concentração de 4,5% que manteve cerca de 93% da atividade do extrato enzimático liofilizado por 32 dias
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 23.05.2014
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ABNT
GIOVANINI, Gabriel Tescarolo. Produção, liofilização, purificação e determinação de especificidade da peptidase isolada do fungo Scopulariopsis koningii. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-30102014-144336/. Acesso em: 13 fev. 2026. -
APA
Giovanini, G. T. (2014). Produção, liofilização, purificação e determinação de especificidade da peptidase isolada do fungo Scopulariopsis koningii (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-30102014-144336/ -
NLM
Giovanini GT. Produção, liofilização, purificação e determinação de especificidade da peptidase isolada do fungo Scopulariopsis koningii [Internet]. 2014 ;[citado 2026 fev. 13 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-30102014-144336/ -
Vancouver
Giovanini GT. Produção, liofilização, purificação e determinação de especificidade da peptidase isolada do fungo Scopulariopsis koningii [Internet]. 2014 ;[citado 2026 fev. 13 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-30102014-144336/
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