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Clonagem, expressão e purificação da quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated author: LAMAS, CÍNTIA BETITE - IQSC
  • School: IQSC
  • Subject: PROTEÍNAS QUINASES
  • Language: Português
  • Abstract: Quinases dependentes de ciclinas (CDKs) compreendem uma família de proteínas que podem ser subdivididas em dois grupos funcionais majoritários baseados na sua função no ciclo celular e/ou controle transcricional. Já foram identificadas mais de 30 CDKs humanas. A CDK10 é uma proteína quinase dependente de ciclina pertencente ao grupo de quinases relacionadas à Cdc2. CDK10 é essencial na fase G2/M do ciclo celular, possivelmente no progresso dessa fase, monitorando a replicação completa do DNA e permitindo que as células passem desse ponto de restrição. Essa proteína é um importante determinante de resistência à terapia endócrina para câncer de mama. Portanto, é um alvo potencial para o desenvolvimento de inibidores, uma vez que está presente em células cancerosas. O estudo da estrutura e função da CDK10 deverá ser realizado após sua clonagem, expressão e purificação. O cDNA da CDK10 foi amplificado por reação em cadeia da polimerase (PCR), e posteriormente, o produto foi aplicado em gel de agarose para análise e purificação. O vetor de clonagem recombinante foi obtido, o qual foi clonado em células competentes e sequenciado. A obtenção do plasmídeo recombinante para expressão deu-se pela inserção do DNA nos vetores de expressão pET28a(+) e pET23a(+) (Novagen). A proteína foi expressa em células competentes e analisada por eletroforese em gel de poliacrilamidaEm seguida, a proteína obtida foi purificada em coluna de afinidade por níquel e em coluna de afinidade por ATP. Com a otimização dos resultados obtidos, será possível, futuramente, caracterizar bioquimicamente a CDK10 e elucidar suas estruturas secundária e terciária. O estudo da CDK10 irá contribuir para o entendimento da sua relação estrutura-função e sua relação com oncogenes e supressores de tumor, e o estudo estrutural para o desenvolvimento de inibidores químicos de baixo peso molecular que possa inibir especificamente a CDK10
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 12.09.2014

  • How to cite
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    • ABNT

      LAMAS. CINTIA BETITE,; CANDURI, Fernanda. Clonagem, expressão e purificação da quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana. 2014.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014.
    • APA

      Lamas. Cintia Betite,, & Canduri, F. (2014). Clonagem, expressão e purificação da quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana. Universidade de São Paulo, São Carlos.
    • NLM

      Lamas. Cintia Betite, Canduri F. Clonagem, expressão e purificação da quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana. 2014 ;
    • Vancouver

      Lamas. Cintia Betite, Canduri F. Clonagem, expressão e purificação da quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana. 2014 ;

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