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Caracterização de A2BP1 na linhagem celular S2 de Drosophila melanogaster (2014)

  • Authors:
  • Autor USP: PEREIRA, GUSTAVO BORGES - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: DROSOPHILA; LINHAGEM CELULAR; EXPRESSÃO GÊNICA
  • Language: Português
  • Abstract: A Ataxin-2 Binding Protein 1 (A2bp1) de Drosophila é membro da família de proteínas ligante de RNA denominada RBFOX, conservada evolutivamente em metazoários. Embora RBFOX seja mais conhecida em mamíferos pelo papel regulador de splicing alternativo tecido-específico, com impacto importante no desenvolvimento e maturação de neurónios, evidências recentes indicam que essas proteínas possam atuar também como reguladoras da transcrição nesse processo. Adicionalmente, em Drosophila melanogaster A2bp1 atua como co-fator transcricional no desenvolvimento da asa, ou como provável repressor traducional necessário para o correto programa de expressão gênica na oogênese, indicando que a família RBFOX pode regular a expressão gênica em diferentes níveis. Atualmente existem oito isoformas preditas para A2bp1 de Drosophila em dois bancos de dados públicos: o NCBI (National Center for Biotechnology Information) e o Flybase. Neste trabalho contribuímos para estender a caracterização desta família-de proteínas em linhagem de células S2, um modelo bastante utilizado para investigações de mecanismos moleculares que regulam a célula eucariótica. Nossos resultados identificaram a existência de transcritos para duas novas isoformas de A2bp1, expressos nessas células, e que nomeamos de A2bp1-N e A2bp1-O. Análises in silico mostraram que esses mRNAs apresentam uma fase aberta de leitura de 662aa e 823aa, respectivamente. As proteínas A2bp1-N e A2bp1-O conservam o motif RRM e a sequência consenso do sinal hidrofóbico de localização nuclear hPY-NLS, caracterizado funcionalmente em células de mamíferos. Essas duas isoformas expressas em fusão no carboxiterminal com um tag V5, ou com a proteína fluorescente m-Cherry, apresentaram localização predominantemente em focos nucleares. No entanto, a fusão de mCherry no aminoterminal de A2bp 1 -O resultou em localização da proteína em focos exclusivamente citoplasmáticos, compatível com opadrão de marcação revelado por anticorpo policlonal gerado contra um fragmento comum às diferentes isoformas de A2bp1. Com esse anticorpo observamos marcação concentrada em focos, localizados predominantemente no citoplasma. Considerando o padrão de localização citoplasmática de A2bp1, e a associação das proteínas da família RBFOX com processos reguladores do metabolismo de RNA, analisamos o padrão de marcação de A2bp1 em relação ao de proteínas presentes em p-bodies, que são grânulos de ribonucleoproteínas (RNP) citoplasmáticos envolvidos na estocagem de mRNAs para posterior tradução e/ou degradação. Os resultados indicaram que embora seja excluída de p-bodies, a marcação de A2bp1 colocaliza-se parcialmente com Tral e Me31b, proteínas que atuam no controle da tradução e estabilidade de mRNAs. De modo interessante, dados bioquímicos existentes na literatura indicam que, em extratos de ovário, A2bp1 interage com Bruno, um repressor traducional com papel importante no início da oogênese por regular a tradução do mRNA da ciclina A. Neste cenário, a demonstração de que diferentes isoformas de A2bp1 são expressas em células S2, localizam-se principalmente em focos citoplasmáticos e potencialmente interagem com proteínas envolvidas em repressão/estabilidade de mRNAs, coloca essa linhagem celular como um modelo interessante para estender o entendimento dos mecanismos de ação dessa família de proteínas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.05.2014

  • How to cite
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    • ABNT

      PEREIRA, Gustavo Borges; PAÇO-LARSON, Maria Luísa. Caracterização de A2BP1 na linhagem celular S2 de Drosophila melanogaster. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014.
    • APA

      Pereira, G. B., & Paço-Larson, M. L. (2014). Caracterização de A2BP1 na linhagem celular S2 de Drosophila melanogaster. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Pereira GB, Paço-Larson ML. Caracterização de A2BP1 na linhagem celular S2 de Drosophila melanogaster. 2014 ;
    • Vancouver

      Pereira GB, Paço-Larson ML. Caracterização de A2BP1 na linhagem celular S2 de Drosophila melanogaster. 2014 ;

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