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Produção, purificação, propriedades funcionais e aplicação de uma poligalacturonase produzida por Neosartorya glabra (2014)

  • Authors:
  • Autor USP: DESAGIACOMO, CARLA CRISTINA VILLELA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: FUNGOS; ENZIMAS PECTINOLÍTICAS (ISOLAMENTO E PURIFICAÇÃO); SUCOS DE FRUTAS (APLICAÇÕES); BIOTECNOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: Pectina é um dos principais componentes da parede celular de plantas. Esses oligossacarídeos podem ser degradados por enzimas pécticas, nomeadas, pectinases. As enzimas pectinolíticas são produzidas principalmente por fungos filamentosos, podendo ser classificadas em esterases (pectinesterase) e despolimerases (poligalacturonases e liases), sendo que apresentam um alto potencial de uso biotecnológico para aumentar a eficiência de filtração e clarificação de sucos de frutos, na maceração, liquefação e extração de tecidos vegetais, mas podem ser responsáveis pela patogênese em plantas. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção do sistema pectinolítico do Nepsartorya glabra, purificação, caracterização bioquímica de uma poligalacturonase e aplicação da mesma em processos de extração de sucos de frutas. Após o screening entre alguns fungos filamentosos, o N. glabra foi o micro-organismo selecionado devido aos altos níveis de enzimáticos produzidos, especialmente poligalacturonase, e a pouca informação sobre esta enzima deste fungo na literatura Poligalacturonases são secretadas principalmente a partir do 4° dia de cultivo sob condições estáticas. As condições padrões de cultura submersa foram com meio Vogel mímico, pH inicial 4,0, sob agitação, por 96 horas a 30°C. As melhores fontes de carbono foram diferentes tipos de pectina (polipectato de sódio, pectina SIGMA e pectina cítrica), ácido monogalacturônico e casca de laranja, limão e maracujá. Em relação à fermentação em substrato sólido, a melhor produção ocorreu com casca de laranja, maracujá e maçã. Poligalactoronases brutas apresentaram excelente estabilidade a 60°C, por 180 minutos, e em pH ácido. A poligalacturonase (PG) em extrato bruto foi purificada utilizando coluna de DEAE-celulose, seguida de CM-celulose com fator de purificação de 4,5 vezes. A purificação foi confirmada porSDS-PAGE, onde foi observado homogeneidade eletroforética A PG purificada apresentou massa molecular de 68,2 kDa por SDS-PAGE. A enzima possui 32% de conteúdo de carboidrato e ponto isoelétrico de 5,4. O produto final formado pela ação da PGPI em polipectato de sódio foi somente ácido monogalacturônico, sendo desta maneira classificada como uma exo-poligalacturonase tipo I. Sua temperatura ótima e pH foram em torne de 65°C e numa faixa de 4,5 - 5,5, respectivamente. Apresentou alta estabilidade térmica acima a 50°C e foi estável numa faixa de pH 5,0 - 6,5, por 24 horas. A enzima foi ativada por BaCl, CuS‘O IND.4’, KCl, Mg‘Cl IND.2’, NaCl e EDTA e inibida por Ca‘Cl IND.2’, Pb‘(‘C IND.2’‘H IND.3’‘O IND.2) IND.2’, NaBr, Al‘Cl IND.3’ e ß-mercaptoetanol. O ‘K IND.m’ foi 6,9 mg/mL, ‘V IND.max’ de 690 µmol/min/mgproteína e eficiência catalítica de 1,97.’10 POT.8’ ‘M POT.-1’‘s POT.-1’. A PG purificada foi identificada como uma exo-PG por espectrometria de massa, estabelecendo uma homologia com exo-poligalacturonases de Aspergillus fumigatus e Neosartorya fischeri. Através de análises em Western Blotting foi possível determinar homologia entre epítopos da PG purificada de N.glabra e a PG de Paecelomyces variotii. Os experimentos de aplicação em extração de sucos mostraram um aumento no volume de extração de sucos e diminuição da turbidez demonstrando um alto potencial de aplicação industrial
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.03.2014

  • How to cite
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    • ABNT

      DESAGIACOMO, Carla Cristina Villela; POLIZELI, Maria de Lourdes Teixeira de Moraes. Produção, purificação, propriedades funcionais e aplicação de uma poligalacturonase produzida por Neosartorya glabra. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014.
    • APA

      Desagiacomo, C. C. V., & Polizeli, M. de L. T. de M. (2014). Produção, purificação, propriedades funcionais e aplicação de uma poligalacturonase produzida por Neosartorya glabra. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Desagiacomo CCV, Polizeli M de LT de M. Produção, purificação, propriedades funcionais e aplicação de uma poligalacturonase produzida por Neosartorya glabra. 2014 ;
    • Vancouver

      Desagiacomo CCV, Polizeli M de LT de M. Produção, purificação, propriedades funcionais e aplicação de uma poligalacturonase produzida por Neosartorya glabra. 2014 ;

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