Novo modelo de expressão heteróloga para estudos de proteinas de membrana (ex:AQP1): oócitos de Rana catesbeiana (2013)
- Authors:
- USP affiliated authors: ARAUJO FILHO, JOAQUIM PROCÓPIO DE - ICB ; MALNIC, GERHARD - ICB ; AZIZ, RAIF MUSA - ICB
- Unidade: ICB
- Subjects: FISIOLOGIA; OOCITOS; RÃ; PROTEINAS DA MEMBRANA; WESTERN BLOTTING
- Language: Português
- Abstract: Introdução Oócitos de Xenopus laevis são utilizados extensivamente como modelo de expressão heteróloga “in vivo” de proteínas de membrana, transportadores e canais, sendo valiosos para estudar eletrofisiologia e biologia molecular de novas proteínas, tal qual o canal para H2O Aquaporina 1 humana (hAQP1), altamente expresso em hemácias e células do túbulo proximal, as quais também medeiam altas taxas de transporte de gases CO2 e NH3. No entanto, devido às restrições impostas pelas entidades governamentais para importação dessas rãs, tornou-se necessário buscar um modelo alternativo de expressão heteróloga, utilizando oócitos de rãs comercializadas no Brasil, como as da espécie Rana catesbeiana. Objetivos Avaliar se oócitos de Rana permitem indução experimental da expressão de hAQP1 na membrana. Métodos Rãs adultas pesando entre 300-350g, anestesiadas por imersão em solução de MS222 (“tricaine methanesulfonate”) foram submetidas a cirurgia 1) para remoção de fragmentos ovarianos e 2) coleta de sangue através de punção cardíaca para medidas da osmolaridade e pH plasmático. Os fragmentos ovarianos foram tratados com 1mg/ml de Colagenase Tipo IA para dissociação e defoliculação dos oócitos sob condições estéreis. Oócitos maduros, isolados, morfologicamente semelhantes ao oócitos de Xenopus foram mantidos em meio de cultura Leibovitz L-15 (específico para ambientes sem manutenção de CO2), pH 7,55 e 185 mOsm a 18C. Após um dia, os oócitos foram injetados com 50 nl de cRNA que codifica a hAQP1 (‘hAQP1’) ou injetados com 50 nl de H2O (‘controle’). Três dias após a injeção de cRNA, foram realizados experimentos de biotinilação das proteínas de superfície com os oócitos ‘hAQP1’ e ‘controle’.Para análise da função da hAQP1 no transporte de H2O, oócitos ‘hAQP1’ e ‘controle’ foram imersos em solução hipotônica (90 mOsm) e o tempo de inchamento/explosão celular foi avaliado por análise observacional. Resultados A osmolaridade plasmática de Rana foi de 185 ± 4,4 (n=21) mOsm e o pH plasmático foi de 7,55 ± 0,6 (n=21) a 18C. Os valores descritos para Xenopus são: 195 mOsm e pH 7,50 a 18C. Foi possível, então, adaptar as soluções utilizadas para o tratamento dos oócitos de Rana. A solução controle padronizada contém (em mM): 90 NaCl, 5 KCl, 1,2 CaCl2, 1 MgCl2, 5 Hepes, pH 7,55 e osmolaridade 185 mOsm a 18C. Resultados preliminares mostram que oócitos ‘hAQP1’ de Rana em meio hipotônico incham em 1,2 ± 0,5 (n=9) min e explodem em 3,1 ± 0,9 (n=9) min. Já o 'controle' não explode após 5 min. Sabe-se que oócitos de Xenopus que expressam hAQP1 explodem entre 30 e 60 seg. Os ensaios de “western blot” de amostras total e biotinilada evidenciaram um banda de 28 kDa, mostrando que hAQP1 foi sintetizada e inserida na membrana dos oócitos de Rana. Este achado corresponde a banda de 28 kDa evidenciada nos ensaios de "western blot" de amostras biotiniladas de hAQP1 em oócitos de Xenopus. Conclusão Dados preliminares indicam que oócitos de Rana podem ser utilizados como novo modelo experimental de expressão heteróloga para estudo de proteínas de membrana, através de técnicas eletrofisiológicas e de biologia molecular.
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- Source:
- Título: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (FeSBE)
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ABNT
BELOTO-SILVA, O et al. Novo modelo de expressão heteróloga para estudos de proteinas de membrana (ex:AQP1): oócitos de Rana catesbeiana. 2013, Anais.. Caxambu: FeSBE, 2013. . Acesso em: 12 fev. 2026. -
APA
Beloto-Silva, O., Santos- Soares, A., Milach-JR, A. C., Procópio, J., Malnic, G., & Musa-Aziz, R. (2013). Novo modelo de expressão heteróloga para estudos de proteinas de membrana (ex:AQP1): oócitos de Rana catesbeiana. In Resumos. Caxambu: FeSBE. -
NLM
Beloto-Silva O, Santos- Soares A, Milach-JR AC, Procópio J, Malnic G, Musa-Aziz R. Novo modelo de expressão heteróloga para estudos de proteinas de membrana (ex:AQP1): oócitos de Rana catesbeiana. Resumos. 2013 ;[citado 2026 fev. 12 ] -
Vancouver
Beloto-Silva O, Santos- Soares A, Milach-JR AC, Procópio J, Malnic G, Musa-Aziz R. Novo modelo de expressão heteróloga para estudos de proteinas de membrana (ex:AQP1): oócitos de Rana catesbeiana. Resumos. 2013 ;[citado 2026 fev. 12 ] - Organização do Sistema Urinário
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