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Ativação de células progenitoras retinianas através de fatores de crescimento e modulação das GTPASES RHO (2013)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: SANTOS, MARINILCE FAGUNDES DOS - ICB ; HAMASSAKI, DANIA EMI - ICB ; YAN, CHAO YUN IRENE - ICB
  • Unidade: ICB
  • Subjects: FISIOLOGIA; RETINA; CAMUNDONGOS; FATORES DE CRESCIMENTO; REGENERAÇÃO (FENÔMENOS BIOLÓGICOS)
  • Language: Português
  • Abstract: Introdução O Corpo Ciliar (CC), uma estrutura adjacente à retina, contém progenitores retinianos em mamíferos, sendo, portanto, relacionado ao possível potencial regenerativo da retina. Desta forma, a ativação das células desta região é uma potente ferramenta para a terapia regenerativa celular e possível resgate visual Objetivos O objetivo deste trabalho foi demonstrar a capacidade de reprogramação das células-progenitoras do CC através do estímulo com fatores de crescimento in vivo e in vitro, assim como estudar o papel das GTPases Rho sobre as células do CC, proteínas com reconhecida importância na diferenciação neuronal e na proliferação celular. Métodos Projeto aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal, CEEA protocolo no. 095/131/02. Camundongos Balb/c adultos (4 a 6 semanas, N=5) receberam injeções intraoculares de fatores de crescimento (FGF 100ng/olho e insulina 2 ug/olho), inibidores de GTPases Rho (Toxina A 10ng/olho, NSC23766 400ng/olho e Y27632 100ng/olho) ou ativador (LPA 400 µM/olho). Após 4 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, seus olhos enucleados, fixados, crioprotegidos e cortados transversalmente em criostato para experimentos de imunofluorescência com os anticorpos para marcadores de células progenitoras (Pax6, Chx10, Rx) e de proliferação (Ki67). Neuroesferas de CC foram obtidas após dissecção manual do CC, dissociação com tripsina, plaqueamento e adição de fatores de crescimento ao meio de cultura (FGF2 10 ng/ml e EGF 20 ng/ml). Após 5 dias em cultura, as neuroesferas foram transportadas para lamínulas de vidro tratadas com Poli-D-lisina e laminina para sua adesão, posteriormente fixadas e imunomarcadas com os anticorpos descritos anteriormente.O RNA total foi extraído com o uso de kit Qiagen (segundo recomendação do fabricante) e analisado por PCR em tempo real (7300 Systems Applied Biosystems) através do uso de cDNA obtido por transcrição reversa direcionada e específica, sendo o gene Gapdh utilizado como controle interno. Análise estatística realizada através do Student t-test, entre os tratamentos e respectivos controles e representado como porcentagem ± desvio padrão. Resultados Durante a ativação com fatores de crescimento, neuroesferas de CC diminuíram suas características de células epiteliais, demonstrado pela diminuição dos transcritos específicos deste tipo celular (RPE65 e Palmidelfina), porém, sem atingir sua completa extinção. Ao mesmo tempo, adquiriram transcritos característicos de células progenitoras retinianas (Pax6, Chx10, Lhx2, Rx). A co-expressão de marcadores progenitores em neuroesferas também foi detectada por imunohistoquímica (Pax6 e Rx). A ativação das GTPases promoveu a co-expressão de Pax6 e Chx10 (aumento de 38,2±0,1% em comparação ao controle), mas não apresentou efeito sobre a proliferação (expressão de Ki67). Por outro lado, a inibição das GTPases aumentou a proliferação (aumento de 32,8±0,2% em comparação ao controle), e potenciou o efeito promovido por fatores de crescimento. Conclusão Nossos resultados indicaram que fatores de crescimento (EGF, FGF ou insulina) promoveram a reprogramação das células do CC em progenitores retinianos, porém com eficiência insuficiente para um potencial tratamento clínico. Por outro lado, a ativação das GTPases Rho induziu altas taxas de reprogramação de células progenitoras e sua inibição superou as taxas de proliferação induzidas por fatores de crescimento, indicando, assim, ser uma importante ferramenta para futuro uso terapêutico.
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  • Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (FeSBE)

  • How to cite
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    • ABNT

      DEL DEBBIO, C. B.; AHMAD, I.; SANTOS, Marinilce Fagundes; HAMASSAKI, Dania Emi; YAN, Chao Yun Irene. Ativação de células progenitoras retinianas através de fatores de crescimento e modulação das GTPASES RHO. Anais.. Caxambu: FeSBE, 2013.
    • APA

      Del Debbio, C. B., Ahmad, I., Santos, M. F., Hamassaki, D. E., & Yan, C. Y. I. (2013). Ativação de células progenitoras retinianas através de fatores de crescimento e modulação das GTPASES RHO. In Resumos. Caxambu: FeSBE.
    • NLM

      Del Debbio CB, Ahmad I, Santos MF, Hamassaki DE, Yan CYI. Ativação de células progenitoras retinianas através de fatores de crescimento e modulação das GTPASES RHO. Resumos. 2013 ;
    • Vancouver

      Del Debbio CB, Ahmad I, Santos MF, Hamassaki DE, Yan CYI. Ativação de células progenitoras retinianas através de fatores de crescimento e modulação das GTPASES RHO. Resumos. 2013 ;


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