Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans (2013)
- Authors:
- Autor USP: CASAROTO, ANA REGINA - FOB
- Unidade: FOB
- Sigla do Departamento: BAE
- Subjects: ESTOMATITE SOB PRÓTESE; CANDIDA ALBICANS; PALATO; APOPTOSE
- Language: Português
- Abstract: A presença de Candida albicans nos biofilmes microbianos da superfície interna das próteses totais superiores está relacionada com uma doença inflamatória no palato, a estomatite protética. Constituinte da defesa inata do hospedeiro, o epitélio bucal, por sua vez, tem a capacidade de reconhecer e reagir aos fatores fúngicos a fim de evitar a invasão pelo microrganismo. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito direto e indireto de C. albicans viável sobre as células epiteliais de palato humano (CEPH) ao longo do tempo. Objetivamos correlacionar os eventos de agressão, apoptose e invasão das CEPH provocados pelo fungo, com as respostas de defesa epitelial mediante produção de óxido nítrico (NO) e expressão gênica do peptídeo antimicrobiano β-defensina 2 (hBD-2). Material e Métodos: As CEPH foram obtidas, parte pelo método explante e parte pelo método enzimático, e mantidas em co-cultivo sobre uma camada de sustentação feederlayer (fibroblastos gengivais humanos mitoticamente inativados). Após desafios das CEPH com C. albicans ATCC 90028 por contato direto fungo-epitélio (D.D.) e indireto pelo sobrenadante da cultura do fungo hifal (D.I.), proporções de desafio de 0,01/1; 0,025/1 e 0,1/1 levedura/queratinócito (FUN/EPI) e tempos experimentais de 3, 6 e 10 h foram determinados; via ensaios de viabilidade celular por imunofluorescência (LIVE/DEAD), e análise qualitativa da invasão celular pelo fungo por meio do método colorimétrico com laranja de acridina. A apoptose epitelial foi determinada pela marcação nuclear fluorescente com Hoechtst 33258. A produção de óxido nítrico (NO) e a expressão de RNAm de hBD-2 foram avaliados por reação colorimétrica de Griess e RT-qPCR, respectivamente. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos aos testes estatísticos ANOVA Fatorial, Teste de Contraste; ou Teste de Mann-Whitney (p<0,05).Resultados: Em 3 h, foi detectado aumento da apoptose das células epiteliais em relação ao Meio (epitélio não desafiado, p<0,05), na proporção 0,1/1 FUN/EPI, a qual manteve-se ao longo do tempo, com o aumento da concentração fúngica e independente de D.D. e D.I. O início da invasão intraepitelial pelo fungo foi observado no tempo de 6 h, em especial na proporção 0,025/1 FUN/EPI, coincidindo com discreto aumento da concentração de NO e expressão máxima de hBD-2 pelas CEPH desafiadas diretamente (p<0,05). Entretanto, nos estágios tardios (10 h) foram observados redução de NO e retorno da expressão de hBD-2 ao basal, com intensificação da invasão epitelial. Conclusão: Estes resultados sugerem que os fatores secretados por C. albicans foram suficientes para agressão das CEPH, com indução da apoptose, mesmo na ausência do contato direto fungo-epitélio. As CEPH, por sua vez, apresentaram respostas de defesa após 6 h de desafio fúngico, por meio da liberação de NO e expressão de hBD-2, porém com necessidade da interação direta fungo-epitélio. A ativação da via de apoptose das CEPH ocorreu previamente à ativação destes mecanismos de defesa epitelial.
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.10.2013
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ABNT
CASAROTO, Ana Regina. Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Bauru, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-22042014-151007/. Acesso em: 03 out. 2024. -
APA
Casaroto, A. R. (2013). Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Bauru. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-22042014-151007/ -
NLM
Casaroto AR. Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans [Internet]. 2013 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-22042014-151007/ -
Vancouver
Casaroto AR. Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans [Internet]. 2013 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-22042014-151007/
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