Adaptção de linhagens celulares humanas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino (2014)
- Authors:
- Autor USP: BIAGGIO, RAFAEL TAGÉ - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: LINHAGEM CELULAR; CULTURA DE CÉLULAS; SOROS; BOVINOS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES
- Keywords: adaptação celular; análise metabólica; caracterização cinética; cell adaptation; criopreservação; cryopreservation; HepG2; HepG2; HKB-11; HKB-11; Human cell lines; kinetic characterization; meios de cultura livres de soro fetal bovino; metabolic analysis; serum-free medium; SK-Hep-1; SK-Hep-1; suspension culture
- Language: Português
- Abstract: Linhagens celulares humanas têm atraído grande interesse devido a sua capacidade de glicosilar proteínas de maneira mais semelhante às proteínas nativas humanas, reduzindo o potencial de respostas imunológicas contra epítopos não humanos. No entanto, por se tratar de uma aplicação recente, essas células ainda não foram extensamente caracterizadas e cultivadas em condições reprodutíveis da escala industrial, ou seja, em suspensão e em meios de cultura livres de soro fetal bovino (SFB). Em função disso, o objetivo principal deste trabalho foi estabelecer culturas livres de SFB e em suspensão para as linhagens celulares humanas SK-Hep-1, HepG2 e HKB-11, que têm despertado grande interesse devido ao potencial de produção de proteínas recombinantes. Para isso, quatro formulações comerciais livres de SFB foram avaliadas. As células que apresentaram bons resultados na adaptação aos meios realizada em garrafas estáticas foram então adaptadas para crescimento em suspensão. Foi possível realizar a adaptação satisfatória da célula HKB-11 ao meio FreeStyle e da célula SK-Hep-1 ao meio SFMII bem como a criopreservação das mesmas também em condições livres de SFB. A caracterização cinética das células adaptadas mostrou que a célula HKB-11 apresentou concentração celular quatro vezes superior a da célula SK-Hep-1 (8,6x106 e 1,9x106 células/mL, respectivamente) e apresentou crescimento celular durante 18 dias em cultura. A velocidade específica de crescimento máxima (?max) foi semelhante nas duas células (0,0159 h-1 para a HKB-11 e 0,0186 h-1 para SK-Hep-1). A limitação do crescimento das células adaptadas não parece estar associada à exaustão de glicose e glutamina, tampouco à formação de lactato em concentrações inibitórias. Todavia, para ambos os casos, foi observada produção de amônia em concentrações consideradas inibitórias (2 - 5 mM). De maneira geral,foi possível estabelecer culturas celulares em condições compatíveis com o desenvolvimento de um bioprocesso reprodutível, seguro e em concordância com as boas práticas de fabricação
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 28.03.2014
-
ABNT
BIAGGIO, Rafael Tagé. Adaptção de linhagens celulares humanas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-09042014-100409/. Acesso em: 25 set. 2024. -
APA
Biaggio, R. T. (2014). Adaptção de linhagens celulares humanas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-09042014-100409/ -
NLM
Biaggio RT. Adaptção de linhagens celulares humanas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino [Internet]. 2014 ;[citado 2024 set. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-09042014-100409/ -
Vancouver
Biaggio RT. Adaptção de linhagens celulares humanas para crescimento em suspensão e meios de cultura livres de soro fetal bovino [Internet]. 2014 ;[citado 2024 set. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-09042014-100409/
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