Subclonagem, expressão e purificação da enzima Hialuronidase-1, variante 8, humana (2013)
- Autores:
- Autor USP: MARIA, ADRIANA DEL MONACO DE - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Assuntos: BIOLOGIA MOLECULAR; CLONAGEM; DNA RECOMBINANTE; MATRIZ EXTRACELULAR
- Idioma: Português
- Resumo: O Ácido Hialurônico, HA, é um dos principais componentes da matriz extracelular dos vertebrados. É um glicosaminoglicano hidrolisado pelas enzimas da família da Hialuronidase, envolvidas na regulação de importantes processos biológicos, como a permeabilidade vascular e a angiogênese. Conforme o interesse pelo desenvolvimento de uma rota de síntese para esta enzima, objetivamos a obtenção de um plasmídeo, contendo a sequência que codifica a variante 8 do gene Hyal-1. Para isto, planejou-se a inserção de dois sítios de restrição para a sub-clonagem, sítio dirigida, BamH-1 na região 5´ e Not-1 na 3´ na sequência do códon da Hyal-1. O inserto foi sub-clonado no plasmídeo, pET28-a, e transfectado para expressão em Escherichia coli Bl-21. A expressão foi induzida por IPTG no melhor tempo, de 4 horas, e a confirmação da expressão protéica foi realizada por Western blotting. Observou-se uma proteína de 45 kDa, confirmando a presença da Hyal-1. Realizou-se a expressão em 4 litros de cultura para obtenção de uma quantia suficiente para purificação em coluna de níquel-agarose. O rendimento neste experimento foi de 25µg por litro. A rota sintética sugerida neste estudo mostrou-se eficiente para obtenção da proteína Hyal-1 recombinante, justificando futuros investimentos na otimização deste processo
- Imprenta:
- Data da defesa: 21.10.2013
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ABNT
DEL MONACO DE MARIA, Adriana. Subclonagem, expressão e purificação da enzima Hialuronidase-1, variante 8, humana. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-25032014-105024/. Acesso em: 18 out. 2024. -
APA
Del Monaco de Maria, A. (2013). Subclonagem, expressão e purificação da enzima Hialuronidase-1, variante 8, humana (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-25032014-105024/ -
NLM
Del Monaco de Maria A. Subclonagem, expressão e purificação da enzima Hialuronidase-1, variante 8, humana [Internet]. 2013 ;[citado 2024 out. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-25032014-105024/ -
Vancouver
Del Monaco de Maria A. Subclonagem, expressão e purificação da enzima Hialuronidase-1, variante 8, humana [Internet]. 2013 ;[citado 2024 out. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-25032014-105024/
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