Neospora caninum: estudo do secretoma e caracterização molecular de três proteínas com domínios Apple (2013)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, LETÍCIA POLLO DE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: ESPECTROMETRIA DE MASSAS; PROTEÍNAS; METABOLISMO; NEOSPORA CANINUM
- Keywords: Apicomplexa; Apicomplexa; Apple domains; cell invasion; dense granules; domínios Apple; grânulos densos; invasão celular; mass spectometry; micronemas; micronemes; nanoLC-MS/MS; nanoLC-MS/MS; Neospora caninum; proteins interaction network; rede de interação de proteínas; rhoptries; roptrias; secretoma; secretome
- Language: Português
- Abstract: Neospora caninum (filo Apicomplexa) é um parasita obrigatório intracelular como todos os membros deste filo, alguns reconhecidos por causarem doenças com impacto relevante na saúde humana (Plasmodium e Toxoplasma) e veterinária (Babesia, Eimeria e Cryptosporidium). Causador da neosporose, N. caninum vem emergindo como um dos maiores causadores de abortos infecciosos em bovinos, levando a consideráveis perdas econômicas na bovinocultura mundial. Devido à sua recente descoberta, o conhecimento sobre diversos processos bioquímicos de N.caninum ainda é limitado, demandando novas pesquisas para a compreensão de seus mecanismos de sobrevivência e consequente identificação de alvos para intervenção terapêutica. O processo de invasão celular é bastante investigado em pesquisas envolvendo apicomplexas, uma vez que a sobrevivência desses parasitas depende do sucesso de sua entrada na célula hospedeira. Proteínas secretadas de organelas filo-específicas (micronemas, roptrias e grânulos densos) estão intimamente envolvidas com a invasão celular. Elas são responsáveis pela interação inicial com a célula hospedeira, participam da junção de movimento formada no momento da invasão, e contribuem para a estabilização do vacúolo parasitóforo. Neste trabalho as proteínas secretadas por taquizoítas de N. caninum foram investigadas de duas formas: (1) por caracterização molecular de proteínas com domínio Apple; e (2) por estudo do secretoma do parasita. Os domínios proteicos do tipo Apple são caracterizados pela capacidade de interação proteína-proteína e proteína-carboidrato, e estão presentes em algumas proteínas micronêmicas com propriedades adesivas. Neste trabalho três proteínas de N. caninum contendo domínios Apple foram caracterizadas: MIC17A, MIC17B e MIC17C. A análise das sequências proteicas e das estruturas dos domínios Apple, obtidas por modelagem molecular, mostraram altaidentidade sequencial e estrutural entre MIC17A e MIC17C. Apesar de ser paráloga às outras duas, MIC17B apresenta diferenças importantes em sua sequência e estrutura. Para MIC17B e MIC17C foram realizados experimentos de detecção das proteínas nativas nos extratos total e secretado do taquizoíta que sugerem diferentes formas de processamento entre essas proteínas no parasita. Para MIC17B foi confirmada a localização em micronemas, num padrão diferente do observado para MIC17C. Os ensaios de invasão combinados aos de localização indicam que estas proteínas estejam relacionadas ao processo de invasão celular, porém, suas funções permanecem desconhecidas. O secretoma é o conjunto de proteínas secretadas pelo parasita e, para explorar a composição deste extrato (ESA) no taquizoíta de N. caninum, duas abordagens complementares foram utilizadas. Na primeira abordagem foram identificadas as proteínas presentes no ESA por espectrometria de massas. Na segunda abordagem realizou-se uma ii quantificação relativa das proteínas, marcadas por dois isótopos, nos extratos totais de taquizoítas submetidos ou não ao estímulo secretório. O resultado esperado seria com as proteínas secretadas diminuídas no parasita estimulado. Em ambas as abordagens foram utilizadas técnicas de espectrometria de massas de alta resolução (nanoLC-MS/MS), o que resultou num alto número de identificações; 615 proteínas no ESA e 2011 proteínas quantificadas. A comparação das duas abordagens permitiu o reconhecimento de proteínas com maior probabilidade de secreção. Uma rede de interação entre as proteínas diferencialmente expressas foi predita, gerando resultados que, associados às informações sobre as proteínas aumentadas, permitiram uma investigação sobre proteínas potencialmente envolvidas com a regulação do metabolismo relacionado à secreção. Os resultados obtidos por ambos os estudos aqui demonstradossomam conhecimento acerca do parasita N. caninum e demonstram ser úteis para guiar a busca e seleção de alvos a serem investigados para o desenvolvimento de terapêutica contra a neosporose
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 08.11.2013
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ABNT
OLIVEIRA, Letícia Pollo de. Neospora caninum: estudo do secretoma e caracterização molecular de três proteínas com domínios Apple. 2013. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-18122013-155545/. Acesso em: 22 jan. 2026. -
APA
Oliveira, L. P. de. (2013). Neospora caninum: estudo do secretoma e caracterização molecular de três proteínas com domínios Apple (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-18122013-155545/ -
NLM
Oliveira LP de. Neospora caninum: estudo do secretoma e caracterização molecular de três proteínas com domínios Apple [Internet]. 2013 ;[citado 2026 jan. 22 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-18122013-155545/ -
Vancouver
Oliveira LP de. Neospora caninum: estudo do secretoma e caracterização molecular de três proteínas com domínios Apple [Internet]. 2013 ;[citado 2026 jan. 22 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-18122013-155545/
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