Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene Smp_158240 de Schistosoma mansoni (2013)
- Authors:
- Autor USP: SOUZA, ALINE KUSUMOTA LUIZ DE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: SCHISTOSOMA MANSONI; CLONAGEM; EXPRESSÃO GÊNICA; BIOQUÍMICA
- Keywords: Compulsory admission; Health system; Insurance health system; Internação compulsória; Internação psiquiátrica; Judicialização da saúde; Justice administration system; Planos de saúde; Psychiatric admission; Sistema Único de saúde
- Language: Português
- Abstract: Segundo dados recentes da Organização Mundial de Saúde, as doenças parasitárias afetam um sexto da população mundial, totalizando de mais de um bilhão de pessoas. A esquistossomose, em particular, é uma doença parasitária negligenciada pela saúde pública, causado pelo parasita helminto trematódeo do gênero Schistosoma, e que afeta mais de 230 milhões de indivíduos em todo o mundo, 6 milhões no Brasil, causando risco a aproximadamente 700 milhões de pessoas. Na busca por novas ferramentas para o combate à esquistossomose, uma importante estratégia consiste na identificação e caracterização de alvos moleculares do parasita Schistosoma. As fumarato hidratases são enzimas que catalisam a hidratação reversível da molécula de fumarato em S-malato e têm sido consideradas potenciais alvos macromoleculares para o planejamento de novos fármacos antiparasitários. Dentro desse contexto, o presente trabalho visou a clonagem, expressão, purificação e caracterização estrutural e bioquímica do produto do gene Smp_158240, predito como codificador da enzima fumarato hidratase para o parasita Schistosoma mansoni. O gene Smp_158240 foi sintetizado quimicamente com otimização de códons para expressão em E. coli e clonado nos vetares de expressão pET28a e pET28sumo. 0 produto do gene, denominado SmFH foi expresso em bactéria E. coli BL21(DE3) e purificado com excelente rendimento e grau de pureza. Estudos de espalhamento dinâmico de luz, associados à cromatografia por filtração em gel indicam que a proteína SmFH se oligomeriza na forma de um tetrâmero, e estudos por dicroísmo circular foram utilizados para estimar o conteúdo de estrutura secundário em 60,8 % de α-hélices, 5,7 % de fita-β e 37,6 % de coil-turn. Apesar dos resultados indicarem que a SmFH se oligomeriza e se enovela como previamente reportado para as enzimas fumarato hidratase da classe II, os ensaios de atividadeindicaram que o produto do gene Smp_158240 apresenta baixa atividade fumarásica e se mostra instável para a realização dos experimentas de cristalização. A realização de predição de estrutura por modelagem molecular por homologia identificou regiões de grandes diferenças entre o modelo gerado para SmFH e as estruturas descritas para outras enzimas da mesma classe. Em particular, uma dessas variações consiste na inserção de 7 resíduos em uma região altamente conservada do sitio ativo (SS-loop), alterando significativamente a conformação e dinâmica da proteína e fornecendo assim as bases estruturais para justificar a falta de atividade observada para o produto codificado pelo gene Smp_158240. Uma análise estrutural cuidadosa do modelo predito para SmFH, associado à análise do padrão da estrutura primária encontrado para enzimas da mesma classe sugere um erro na sequência do gene depositada no banco de dados e permite propormos a carreta sequência para o gene que codifica a enzima fuma rato hidratase em Schistosoma mansoni
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 27.09.2013
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ABNT
SOUZA, Aline Kusumota Luiz de. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene Smp_158240 de Schistosoma mansoni. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 28 fev. 2026. -
APA
Souza, A. K. L. de. (2013). Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene Smp_158240 de Schistosoma mansoni (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Souza AKL de. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene Smp_158240 de Schistosoma mansoni. 2013 ;[citado 2026 fev. 28 ] -
Vancouver
Souza AKL de. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene Smp_158240 de Schistosoma mansoni. 2013 ;[citado 2026 fev. 28 ]
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