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Tese

Identificação de áreas neurogênicas no sistema nervoso central de cobaias (Cavia porcellus, Linnaeus 1758): cultura, caracterização e diferenciação de precursores neurais (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: FONSECA, ERIKA TOLEDO DA - FMVZ
  • Unidade: FMVZ
  • Sigla do Departamento: VCI
  • Subjects: CÉLULAS CULTIVADAS (CARACTERÍSTICAS); CÉLULAS-TRONCO (ESTUDO IN VITRO); NEUROGENÉTICA; SISTEMA NERVOSO CENTRAL (ESTUDO)
  • Keywords: Células-tronco neurais; Cobaias; Cultura e Caracterização in vitro; Culture and In vitro characterization; Guinea pigs; Neural stem cells; Subventricular zone; Zona subventricular
  • Language: Português
  • Abstract: O presente trabalho relata a identificação de áreas neurogênicas, o cultivo, identificação e caracterização de precursores neurais obtidos do encéfalo de fetos de cobaias. Áreas potencialmente neurogênicas no encéfalo de neonatos foram identificadas por imunohistoquímica para a bromodeoxiuridina (BrdU), após inoculação da droga. A incorporação de BrdU foi detectada principalmente em células das áreas subjacentes ao ventrículo lateral, hipocampo e bulbo olfatório, indicando proliferação celular e sugerindo o potencial neurogênico dessas áreas. A seguir, realizou-se o cultivo de precursores neurais a partir da zona subventricular (SVZ) dos ventrículos laterais. Após aproximadamente uma semana de cultivo, as células da SVZ em multiplicação ativa originaram abundantes massas celulares (neuroesferas, NSFs). Células dissociadas a partir das NSFs primárias foram capazes de gerar novas neuroesferas após alguns dias de cultivo. As NSFs proliferaram em número e em tamanho, podendo ser subcultivadas por até 5-6 passagens, com intervalos de uma semana, permanecendo viáveis por até 60 dias. Nesse período, as NSFs foram congeladas e descongeladas, tendo sido preservadas a sua viabilidade e capacidade proliferativa. Ensaios de viabilidade pelo método colorimétrico de MTT revelaram diferenças de viabilidade entre NSFs cultivadas a partir de SVZs de animais de diferentes idades (fetos, 7, 30 e 180 dias de vida). NSFs dissociadas apresentaram cerca de 2,3% de morte celular por apoptose ecerca de 3,1% de morte por necrose. NSFs íntegras e dissociadas foram submetidas a imunofluorescência (IF), utilizando-se anticorpos para marcadores de células-tronco (nestina), neurônios (Beta-III-tubulina), oligodendrócitos (mGALC) e astrócitos (GFAP). Marcação difusa, de intensidade variável, foi observada no citoplasma de células das NSFs e nas células individualizadas, mas o percentual de células expressando os diferentes marcadores não foi determinado. Quando cultivadas em meio contendo B27, sem fatores de crescimento, as NSFs apresentaram evidências de diferenciação, originando células aderentes a superfície do frasco, com características morfológicas diferentes as das NSFs, indicando diferenciação. Citometria de fluxo de células das NSFs após a diferenciação revelou 13,3% positivas para nestina, aproximadamente 5,5% positivas para beta-III-tubulina, 9% positivas para GFAP e 7,8% positivas para mGalC. Células diferenciadas foram então submetidas a teste de funcionalidade, pela mensuração de influxo de cálcio após estímulo com ácido gama amino butírico (GABA) e glutamato. A adição de GABA e glutamato resultou em estimulação de algumas células diferenciadas, que foi observado por meio do aumento da fluorescência das mesmas. Portanto, células cultivadas e diferenciadas in vitro a partir da SVZ de fetos de cobaias apresentam indicadores funcionais de neurônios. A capacidade das células da SVZ de fetos cobaias originarem células neurais funcionais in vitro é promissora no sentido de aprofundar as pesquisas e viabilizar o uso terapêutico de células-tronco em disordens do sistema nervoso
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 18.12.2012
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      FONSECA, Erika Toledo da. Identificação de áreas neurogênicas no sistema nervoso central de cobaias (Cavia porcellus, Linnaeus 1758): cultura, caracterização e diferenciação de precursores neurais. 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-04072013-120221/. Acesso em: 24 abr. 2024.

    • APA

      Fonseca, E. T. da. (2012). Identificação de áreas neurogênicas no sistema nervoso central de cobaias (Cavia porcellus, Linnaeus 1758): cultura, caracterização e diferenciação de precursores neurais (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-04072013-120221/

    • NLM

      Fonseca ET da. Identificação de áreas neurogênicas no sistema nervoso central de cobaias (Cavia porcellus, Linnaeus 1758): cultura, caracterização e diferenciação de precursores neurais [Internet]. 2012 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-04072013-120221/

    • Vancouver

      Fonseca ET da. Identificação de áreas neurogênicas no sistema nervoso central de cobaias (Cavia porcellus, Linnaeus 1758): cultura, caracterização e diferenciação de precursores neurais [Internet]. 2012 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-04072013-120221/

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