Silenciamento do gene HIF1A na linhagem de meduloblastoma exposta ao ambiente de hipóxia (2013)
- Authors:
- Autor USP: CRUZEIRO, GUSTAVO ALENCASTRO VEIGA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RPP
- Subjects: NEOPLASIAS DA MEDULA ESPINHAL; GENES; ANÓXIA
- Language: Português
- Abstract: Introdução: O meduloblastoma (MB) é o tumor cerebral maligno mais prevalente em crianças, que se desenvolve a partir de células-tronco precursoras neurais da camada granular do cerebelo. Os pacientes com meduloblastoma são divididos em grupos com base na idade, grau de ressecção e disseminação da doença. A hipóxia é um estado de redução da tensão de oxigênio e ocorre naturalmente em diversos processos fisiológicos. No entanto, há também situações patológicas em que o estado de hipóxia também pode estar presente, como por exemplo, na isquemia cerebral ou pulmonar e no câncer. Este estado fisiológico induz a síntese de HIF1A, um fator de transcrição que promove a expressão de genes próangiogênicos como o VEGF e outros genes relacionados a prognósticos ruins, como SLC2AI (facilitador transportador de glicose), CA9 (Anidrase carbónica). Objetivos: avaliar a expressão de mRNA de HIFIA e dos genes regulados por HIF1: CÀ9, SLC2A1 e VEGF na linhagem de meduloblastoma pediátrica UW402 submetidas às condições de normóxia e hipóxia, silenciar a expressão, através de siRNA, o gene HIFIA na linhagem UW402 submetida à hipóxia e avaliar a expressão de RNAm dos genes CA9, SLC2A1 e VEGF póssilenciamento. Avaliar HIF1A como alvo terapêutico. Metodologia: A linhagem celular UW402 foi cultivado em meio HAM F10 e submetida a hipóxia 2,0% durante 12 horas. Outros foram tratados com reagentes miméticos de hipóxia cloreto de cobalto (Co‘Cl IND. 2’) e desferroxamina (DFX) numa concentração de 50 ‘mü’ M em 24 horas de exposição. Para a rqPCR foram utilizadas sondas Taqman® para o genes HIFIA, VEGF, SLC2AI e CA9 e controles endógenos 18S e HPRT. Os ensaios de proliferação foram realizados utilizando o kit XTT (SIGMA®). O silenciamento foi realizado utilizando o oligo de siRNA de HIFIA e sirva scambles (Ambion®) para o controle e o agente de transfecção lipofectamina2000.A transfecção foi avaliado após 24 horas. O silenciamento foi realizado em placas de 6 poços enquanto o ensaio de proliferação foi realizado em placas 96 poços. Foi realizado Western blot utilizando anti-corpo anti-HIFlA da Abcam e controle GAPDH. Para todos ensaios funcionais houveram 3 experimentas independentes para o teste de ANOVA no programa Package SPSS Statistics 17.0. Resultados: O tratamento selecionado para a exposição à hipóxia foi a utilização do Co‘Cl IND. 2’. Após a exposição houve um aumento na expressão de HIFIA, VEGF SLC2AI e CA9. O silenciamento de HIFIA atingiu 88% de eficiência havendo diminuição na expressão da proteína HIF1A e diminuição na expressão de mRNA de VEGF, SLC2A1 e CA9. Ocasionou redução na taxa de proliferação em 30%. Conclusão: Este estudo sugere que este fator de transcrição pode ser um alvo-terapêutico importante a ser estudado, pois este está conectado em diversas vias regulatórias que participam de processos fundamentais envolvidos no processo de carcinogênese
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 10.06.2013
-
ABNT
CRUZEIRO, Gustavo Alencastro Veiga. Silenciamento do gene HIF1A na linhagem de meduloblastoma exposta ao ambiente de hipóxia. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 18 out. 2024. -
APA
Cruzeiro, G. A. V. (2013). Silenciamento do gene HIF1A na linhagem de meduloblastoma exposta ao ambiente de hipóxia (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Cruzeiro GAV. Silenciamento do gene HIF1A na linhagem de meduloblastoma exposta ao ambiente de hipóxia. 2013 ;[citado 2024 out. 18 ] -
Vancouver
Cruzeiro GAV. Silenciamento do gene HIF1A na linhagem de meduloblastoma exposta ao ambiente de hipóxia. 2013 ;[citado 2024 out. 18 ] - Investigação de novos alvos terapêuticos baseado na classificação dos subgrupos moleculares do meduloblastoma
- CTGF expression is indicative of better survival rates in patients with medulloblastoma
- Interaction between DUSP1 and YAP1 in pancreatic ductal adenocarcinoma
- The therapeutic potential of Aurora kinases targeting in glioblastoma: from preclinical research to translational oncology
- Frequency of the TP53 p.R337H mutation in a Brazilian cohort of pediatric patients with solid tumors
- Notch pathway in ependymoma RELA-fused subgroup: upregulation and association with cancer stem cells markers expression
- Arsenic Trioxide exerts cytotoxic and radiosensitizing effects in pediatric Medulloblastoma cell lines of SHH Subgroup
- YAP1 is a potential predictive molecular biomarker for response to SMO inhibitor in medulloblastoma cells
- The interplay between musashi and notch pathways in pediatric medulloblastomas
- A simplified approach using Taqman low-density array for medulloblastoma subgrouping
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
