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Tese

Isolamento, caracterização estrutural e bioquímica de uma nova fosfolipase ‘A IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta rhombeata (2013)

  • Authors:
  • Autor USP: CORDEIRO, FRANCIELLE ALMEIDA - FCFRP
  • Unidade: FCFRP
  • Sigla do Departamento: 604
  • Subjects: VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; SERPENTES; FOSFOLIPASES
  • Language: Português
  • Abstract: As serpentes contêm em sua peçonha inúmeras substanciar que vão desde componentes inorgânicos até proteínas complexas com diferentes atividades sobre diversos sistemas fisiológicos. As serpentes do género Lachesis estão distribuídas na floresta tropical da América Central e do Sul, incluindo o Brasil. Entre as substanciar encontradas na peçonha dessas serpentes estão as fosfolipases ‘A IND. 2’ (‘PLA IND. 2’), que constituem uma família de enzimas que catalisam a hidrólise da ligação éster sn-2 em glicerofosfolipídeos e exibem uma variedade de atividades fisiológicas e patológicas, incluindo neurotoxicidade pré e pós-sináptica. Elas induzem a formação de edema, afetam a agregação plaquetária, além de serem potentes promotores de inflamação. Os objetivos desse trabalho foram o isolamento, a caracterização estrutural e bioquímica de uma nova ‘PLA IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta. A peçonha foi submetida a uma filtração em gel em coluna HiPrep Sephacryl S200, obtendo-se as frações LmS-A a LmS-K. As fiações LmS-G, LmS-H e Lms-I apresentaram elevada atividade fosfolipásica, com destaque para a fiação LmS-G, que foi então submetida a uma cromatografia de fase reversa, obtendo-se um pico majoritário denominado Lmr-‘PLA IND, 2’. A sequência de aminoácidos da Lmr-‘PLA IND, 2’ apresentou alta identidade com ‘PLA IND, 2’s já descritas na literatura, porém, com alguns resíduos distintos, caracterizando-a como uma nova ‘PLA IND, 2’. Além disso, a enzima possui o resíduo D49 na sua sequência de aminoácidos, sugerindo ser uma ‘PLA IND, 2’ cataliticamente ativa, confirmado pelo ensaio de atividade hemolítica indireta. A massa malar determinada por espectrometria de massas foi de 13,9 kDa. Através de eletroforese bidimensional, foi determinado o ponto isoelétrico de 5,49, indicando ser uma ‘PLA IND, 2’ ácida. Os parametros cinéticos obtidosforam velocidade máxima (‘V IND. max’) e a constante de Michaelis (‘K IND. m’) de 1,147 nmol/min/mL e 0,404 mM além de ‘K IND. cat’ = 0,41 min~, ou número de turnover, e a eficiência catalítica ‘K IND. cat’/‘K IND. m’= 1,02 ‘mM POT. -1’‘min POT -1’ sobre o substrato NOB (3(octanoyloxy)benzoic acid). A Lmr-‘PLA IND, 2’ inibe a agregação plaquetária, é edematogênica, mas não é miotóxica. Os níveis plasmáticos de creatina cinase, proteínas, ureia e ‘gama’glutamiltranspeptidase de camundongos que receberam injeção de Lmr-‘PLA IND, 2’ não foram alterados. Estes dados juntamente com as análises de miotoxicidade demonstraram que a enzima tem baixa toxicidade in vivo. A elevada atividade catalítica e baixa toxicidade da Lmr‘PLA IND, 2’ tornam esta molécula promissora para o desenvolvimento de fármacos
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 08.05.2013
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      CORDEIRO, Francielle Almeida. Isolamento, caracterização estrutural e bioquímica de uma nova fosfolipase ‘A IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta rhombeata. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05092013-161454/. Acesso em: 31 dez. 2025.

    • APA

      Cordeiro, F. A. (2013). Isolamento, caracterização estrutural e bioquímica de uma nova fosfolipase ‘A IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta rhombeata (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05092013-161454/

    • NLM

      Cordeiro FA. Isolamento, caracterização estrutural e bioquímica de uma nova fosfolipase ‘A IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta rhombeata [Internet]. 2013 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05092013-161454/

    • Vancouver

      Cordeiro FA. Isolamento, caracterização estrutural e bioquímica de uma nova fosfolipase ‘A IND. 2’ presente na peçonha de Lachesis muta rhombeata [Internet]. 2013 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-05092013-161454/

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