Tese

Validação do método High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações no gene G6PC (2013)

• Authors:
  • Verzola, Lívia Ferreira Silva
  • Rodrigues, Maria Carolina de Oliveira (Orientador)
• Autor USP: VERZOLA, LÍVIA FERREIRA SILVA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RCM
• Subjects: METABOLISMO; GLICOGENOSE; METODOLOGIA DA PESQUISA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO; MUTAÇÃO GENÉTICA
• Language: Português
• Abstract: Erros inatos do metabolismo são distúrbios bioquímicos, geneticamente determinados, nos quais um defeito enzimático específico produz um bloqueio metabólico que pode originar uma doença. Uma dessas doenças é a glicogenose, que compreende um grupo de doenças autossômicas recessivas cansadas por defeitos na síntese ou no catabolismo do glicogênio. Entre as glicogenoses, a forma mais comum é a tipo I, com uma frequência 1:100.000 nascimentos, caracterizada por hipoglicemia, hepatomegalia, retardo do crescimento, hiperlipidemia e acidose láctica A doença é cansada por uma deficiência na enzima da glicose-6-fosfato (G6Pase) que tem atividade no fígado, rins e mucosa intestinal, gerando um acúmulo de glicogênio nestes órgãos. Esta enzima tem uma importância biológica na homeostase e na concentração de glicose no sangue, agindo nas vias da glicogenólise e na gliconeogenese. Várias mutações no gene G6PC já foram descritas na literatura; entre as principais temos deleções, translocações e inserções. A técnica PCR SSCP (Single-strand conformation polymorphism) e o sequenciamento são métodos atualmente empregados para detecção de mutações no gene que codifica a enzima G6Pase. Entretanto, enquanto o primeiro é pouco sensível, o segundo é caro, complexo e requer tempo, portanto justificando a busca por métodos alternativos. O high resolution melting (HRM) é um método poderoso em biologia molecular para a detecção de mutações e polimorfismos, descoberto e desenvolvido na Universidade de Utah (EUA). Trata-se de uma técnica relativamente nova, utilizado para identificar as variações nas sequências de ácidos nucléicos, baseado na detecção de pequenas diferenças na curva de dissociação (PCR de fusão). Possui várias vantagens sobre os outros métodos, como: baixo custo, baixo consumo de reagentes, fluxo de trabalho simples e rápido, e rápida otimização. Os objetivos do presenteestudo foram: implantar uma metodologia alternativa de diagnóstico preciso para a doença glicogenose tipo I através do HRM, identificar e caracterizar as mutações do gene G6PC através de sequenciamento e comparar os resultados das mutações no gene G6PC obtidos pelos métodos HRM e Sequenciamento. Seis pacientes portadores de glicogenose tipo 1, acompanhados no ambulatório de Hepatologia Infantil do HCFMRP-USP, foram incluídos no estudo, após assinatura de termo de consentimento pelos mesmos ou por seus responsáveis legais. Quatro outros indivíduos também foram incluidos como controles, sendo três portadores de glicogenose de subtipos diferentes de 1 e o quarto, um paciente saudável. Foram colhidos 5ml de sangue total de cada paciente, e todas as amostras foram submetidas a HRM, seguido por sequenciamento gênico. As amostras dos pacientes-controle, doentes ou saudável, não apresentaram anormalidades ao HRM ou ao sequenciamento. O HRM detectou mutações em pelo menos um dos cinco éxons do gene G6PC, em todos os seis pacientes com glicogenose tipo 1 analisados, totalizando sete mutações. Quando analisadas por sequenciamento gênico, houve total concordância de mutações nos mesmos exons identificados pelo HRM. Concluímos que o HRM é um método diagnóstico promissor para as glicogenoses do tipo I, que poderá, futuramente, substituir técnicas mais caras. Será preciso, entretanto, aumentar o número de pacientes testados, visando avaliar a real concordância entre métodos. A validação deste método poderá também ser, posteriormente, utilizada para diagnosticar outras doenças
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2013
• Data da defesa: 22.03.2013

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How to cite

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• ABNT

  VERZOLA, Lívia Ferreira Silva. Validação do método High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações no gene G6PC. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 12 jan. 2026.

• APA

  Verzola, L. F. S. (2013). Validação do método High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações no gene G6PC (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Verzola LFS. Validação do método High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações no gene G6PC. 2013 ;[citado 2026 jan. 12 ]

• Vancouver

  Verzola LFS. Validação do método High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações no gene G6PC. 2013 ;[citado 2026 jan. 12 ]

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