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Tese

Proteínas envolvidas na secreção microapócrina na lagarta de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, WALCIANE DA - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: PROTEÍNAS; SISTEMA DIGESTÓRIO; LEPIDOPTERA; INTESTINO DE ANIMAL
  • Language: Português
  • Abstract: A região anterior do intestino médio de Lepidoptera apresenta uma secreção microapócrina de enzimas digestivas com vesículas migrando pelo interior das microvilosidades. Essas vesículas brotam das microvilosidades intestinais como vesículas de membrana dupla e são descarregadas dentro do lúmen. O objetivo desse trabalho foi identificar as proteínas secretadas e aquelas envolvidas na maquinaria secretória microapócrina em Spodoptera frugiperda. Para isso, vesículas microapócrinas foram preparadas e usadas para a produção de anticorpo policlonal. Esse anticorpo foi utilizado para varrer uma biblioteca de expressão de cDNA do intestino médio de S. frugiperda. Também obtivemos um transcriptoma por pirosequenciamento de uma biblioteca de cDNA proveniente dos transcritos do intestino médio do mesmo inseto. Os clones positivos da varredura foram sequenciados, montados e submetidos a um BLASTN contra as sequências obtidas pelo pirosequenciamento, o que resultou na extensão dessas sequências. Usamos ainda as sequências geradas pelo pirosequenciamento para reanalisar sequências de proteínas presentes nas membranas microvilares, que tinham sido obtidas anteriormente em nosso laboratório (Ferreira et al., 2007). A reanálise das sequências de proteínas microvilares gerou 66 proteínas preditas. Dessas, 18 foram consideradas contaminantes de outros compartimentos celulares e 48 associadas às membranas microvilares. A análise das sequências obtidas das vesículas microapócrinas gerou 50 proteínas preditas que podem ser secretadas por essa rota. As sequências encontradas tanto em membrana microvilar quanto em vesículas microapócrinas podem ser classificadas em 8 grupos, de acordo com sua função: (1) enzimas digestivas; (2) proteínas da membrana peritrófica; (3) envolvidas com proteção; (4) transportadores; (5) receptores; (6) proteínas da maquinaria secretória; (7) proteínas decitoesqueleto; (8) com função desconhecida nesse local. Em ambas as preparações existem uma predominância de sequências de enzimas digestivas. Nas membranas microvilares a maioria das sequências são aminopeptidases, enquanto nas vesículas microapócrinas a maioria são lipases. Os cDNAs correspondentes as proteínas que poderiam estar envolvidas na maquinaria secretória foram clonados e sequenciados. São elas: fimbrina, cofilina, gelsolina-1 e miosina I. RT-PCRs semi-quantitativas dessas proteínas em diferentes tecidos do inseto (intestino, túbulos de Malpighi, corpo gorduroso e carcaça) mostraram que somente gelsolina-1 está presente exclusivamente no intestino. Os domínios G1-G3 da gelsolina característica do intestino (gelsolina-1) foram expressos e usados para produzir anticorpos em coelhos. Esses anticorpos reconhecem a proteína recombinante e uma proteína presente no epitélio intestinal com massa molecular compatível com a massa predita para gelsolina-1. Foi possível diminuir a expressão de gelsolina-1 utilizando RNA interferente
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 23.11.2012
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Walciane da. Proteínas envolvidas na secreção microapócrina na lagarta de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera). 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-02052013-083444/. Acesso em: 18 nov. 2024.

    • APA

      Silva, W. da. (2012). Proteínas envolvidas na secreção microapócrina na lagarta de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-02052013-083444/

    • NLM

      Silva W da. Proteínas envolvidas na secreção microapócrina na lagarta de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) [Internet]. 2012 ;[citado 2024 nov. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-02052013-083444/

    • Vancouver

      Silva W da. Proteínas envolvidas na secreção microapócrina na lagarta de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) [Internet]. 2012 ;[citado 2024 nov. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-02052013-083444/

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