Estabelecimento de um ensaio funcional de ligação de proteínas de merozoítas de Plasmodium vivax a eritrócitos humanos por citometria de fluxo (2012)
- Authors:
- Autor USP: FRANçOSO, KATIA SANCHES - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Subjects: PARASITOLOGIA; MALÁRIA (EPIDEMIOLOGIA); PLASMODIUM; CITOMETRIA DE FLUXO
- Language: Português
- Abstract: A invasão de eritrócitos por merozoítas de Plasmodium é um processo bastante complexo em que várias proteínas do parasita interagem com receptores presentes na célula hospedeira. É nossa hipótese que o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) e a Proteína 1 da Superfície do Merozoíta (MSP1) estejam envolvidas na adesão ao eritrócito, no momento da invasão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de ligação de proteínas de merozoítas de P. vivax a eritrócitos humanos utilizando um novo ensaio de citometria de fluxo e o clássico ensaio de citoaderência. Para tanto, a ligação das proteínas recombinantes correspondentes à região C-terminal de 19 kDa da MSP1 (PvMS´P1IND.19´), ao ectodomínio (PvAMA-´1IND.E´) e aos domínios I-II e II de AMA-1 (PvAMA-´1IND.DI-II´ e PvAMA-´1IND.DII´ ) foi avaliada por citometria de fluxo utilizando anticorpo fluorescente contra cauda de histidina. A proteína recombinante baseada na região II da Proteína Ligante de Duffy (PvDBP-RII) foi utilizada como controle positivo e a tioredoxina humana como controle negativo. Os dados foram expressos pela média da intensidade de fluorescência (MIF). Os resultados dos ensaios de citometria de fluxo confirmaram a ligação de PvDBP-RII a eritrocitos Duffy A (MIF=1997±405) e Duffy B (MIF= 5760±303). No entanto, não foi possível detectar a ligação de PvMS´P1IND.19´ (MIF=201±47), de PvAMA-´1IND.E´ (MIF=536±99) e dos domínios PvAMA- ´1DIND.I´-II (MIF=120±12) e PvAMA-´1DIND.II´ (MIF=179±30). Soro policlonal de camundongos BALB/c imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação da proteína aos eritrócitos em até 66%. Tais resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. Para tanto, células COS-7 foram transfectadas com plasmídeos recombinantes codificando as proteínas PvDBPRII, PvMS´P1IND.19´, PvAMA-´1IND.DI-II´ e PvAMA-´1DIND.II´I em fusãocom GFP. A eficiência de transfecção e a expressão destas proteínas na superfície das células foram confirmadas por citometria de fluxo, utilizando anticorpos policlonais produzidos em camundongos. A ligação foi avaliada pela formação de rosetas entre as células transfectadas e eritrócitos humanos por microscopia de fluorescência. Observamos que as células transfectadas expressando PvDBP-RII foram capazes de se ligar a eritrócitos humanos Duffy A (274±144 rosetas/25 campos) e Duffy B (356±129 rosetas/25 campos). No entanto, não foram visualizadas rosetas nos ensaios realizados com células expressando PvMS´P1IND.19´, PvAMA-´1IND.E´, PvAMA-´1IND.DI-II´ e PvAMA-´1DIND.II´I, indicando a ausência de ligação destas proteínas a eritrócitos humanos. Soro de camundongos imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação aos eritrócitos em até 99%. Os resultados obtidos nesse trabalho demonstram que fomos capazes de desenvolver um ensaio baseado em citometria de fluxo para avaliação da ligação de proteínas a eritrócitos humanos, cujos resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. No entanto, não foi possível detectar a ligação das proteínas PvMS´P1IND.19´ e PvAMA-1 a eritrócitos humanos
- Imprenta:
- Data da defesa: 25.10.2012
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ABNT
FRANÇOSO, Katia Sanches. Estabelecimento de um ensaio funcional de ligação de proteínas de merozoítas de Plasmodium vivax a eritrócitos humanos por citometria de fluxo. 2012. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-01032013-101304/. Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Françoso, K. S. (2012). Estabelecimento de um ensaio funcional de ligação de proteínas de merozoítas de Plasmodium vivax a eritrócitos humanos por citometria de fluxo (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-01032013-101304/ -
NLM
Françoso KS. Estabelecimento de um ensaio funcional de ligação de proteínas de merozoítas de Plasmodium vivax a eritrócitos humanos por citometria de fluxo [Internet]. 2012 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-01032013-101304/ -
Vancouver
Françoso KS. Estabelecimento de um ensaio funcional de ligação de proteínas de merozoítas de Plasmodium vivax a eritrócitos humanos por citometria de fluxo [Internet]. 2012 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-01032013-101304/ - Plasmodium vivax malaria vaccine: immunization with a novel chimeric recombinant protein generates high IgG antibody titers and IFN-γ-secreting cells in mice
- Plasmodium vivax malaria vaccine: immunization with a novel chimeric recombinant protein generates high IgG antibody titers and IFN-y-secreting cells in mice
- Immunogenicity of a multi-antigen formulation based on plasmodium vivax malaria vaccine candidates
- Invasion-inhibitory antibodies elicited by immunization with Plasmodium vivax apical membrane antigen-1 expressed in Pichia pastoris yeast
- Prime-boost vaccination with recombinant protein and adenovirus-vector expressing Plasmodium vivax circumsporozoite protein (CSP) partially protects mice against Pb/Pv sporozoite challenge
- Comparação da imunogenicidade de duas proteínas recombinantes baseadas na proteína circumsporozoíta (CS) de Plasmodium vivax
- Immunogenicity of a malaria vaccine candidate based on allelic forms of the plasmodium vivax circumsporozoite antigen administered in mice using different adjuvant formulations
- Naturally acquired immune response against a chimeric protein representing two highly antigenic proteins of plasmodium vitax
- Interaction between apical membrane antigen 1 of Plasmodium vivax with human erythrocytes detected by flow cytometry
- Recombinant Plasmodium vivax AMA1: production and purification under GLP conditions and analysis of immunogenicity in mice
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