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Tese

Obtenção de GFP5-scFv recombinante reativo à LDL(-): possíveis aplicações na investigação da aterosclerose (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: GUILHERME, DANIEL FERREIRA - FCF
  • Unidade: FCF
  • Sigla do Departamento: FBC
  • Subjects: BIOQUÍMICA ANALÍTICA; ARTERIOSCLEROSE; DOENÇAS CARDIOVASCULARES; LIPOPROTEÍNAS LDL
  • Language: Português
  • Abstract: A aterosclerose é a doença de base das principais complicações cardiovasculares. Os produtos de modificação das lipoproteínas de baixa densidade, como a subfração eletronegativa LDL (-), exercem um importante papel na progressão da aterosclerose. O objetivo do presente trabalho foi expressar a proteína de fusão, GFP5-scFv anti-LDL (-), desenvolver um método para detecção de LDL (-), assim como avaliar a possível utilização desta proteína como uma ferramenta para monitorar os ensaios de formação de células espumosas. A proteína GFP5-scFv anti-LDL (-) foi expressa em E. coli BL21DE3. Esta proteína de fusão foi desnaturada com 7M de ureia, purificada por cromatografia de afinidade e reenovelada por gradiente de diálise na presença de poliestireno sulfonado. A massa molecular da proteína foi confirmada por SDS-PAGE e sua afinidade de ligação à LDL (-) confirmada pelo dot blot e ELISA. O espectro de emissão de fluorescência da GFP5-scFv anti-LDL (-) é qualitativamente equivalente ao da GFP5, porém com intensidade de emissão mais baixa. Na tentativa de superar essa limitação tentou-se realizar a inserção de um peptídeo ligante flexível entre os domínios de ligação da GFP5 e do scFv anti-LDL (-) para melhorar a eficiência de emissão de fluorescência da quimera. Os ensaios in vitro com macrófagos RAW 264.7 demonstraram que a GFP5-scFv anti-LDL (-) não apresentou toxicidade significante e não reduziu a captação de LDL (-) pelos macrófagos. Demonstrou-se por microscopia confocal, quea GFP5-scFv anti-LDL é internalizada pelos macrófagos e pode ser visualizada no interior destas células. Portanto, a proteína recombinante GFP5-scFv anti-LDL (-) é uma ferramenta que poderá ser utilizada em ensaios in vitro com macrófagos para o estudo da aterosclerose
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 12.09.2012
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      GUILHERME, Daniel Ferreira. Obtenção de GFP5-scFv recombinante reativo à LDL(-): possíveis aplicações na investigação da aterosclerose. 2012. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-16102012-144328/. Acesso em: 19 set. 2024.

    • APA

      Guilherme, D. F. (2012). Obtenção de GFP5-scFv recombinante reativo à LDL(-): possíveis aplicações na investigação da aterosclerose (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-16102012-144328/

    • NLM

      Guilherme DF. Obtenção de GFP5-scFv recombinante reativo à LDL(-): possíveis aplicações na investigação da aterosclerose [Internet]. 2012 ;[citado 2024 set. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-16102012-144328/

    • Vancouver

      Guilherme DF. Obtenção de GFP5-scFv recombinante reativo à LDL(-): possíveis aplicações na investigação da aterosclerose [Internet]. 2012 ;[citado 2024 set. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-16102012-144328/

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