Complexos macromoleculares da via específica de incorporação de selênio de Escherichia coli (2013)
- Authors:
- Autor USP: SERRÃO, VITOR HUGO BALASCO - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: ESCHERICHIA COLI; RNA DE TRANSFERÊNCIA; PROTEÍNAS (ESTUDO)
- Keywords: Complexos macromoleculares; Interação proteína-proteína; Macromolecular assemblies; Protein-protein interactions; Selenocisteína; Selenocysteine
- Language: Português
- Abstract: A existência de uma maior variedade de aminoácidos codificados pelo código genético tem estimado estudos sobre os mecanismos de síntese, reconhecimento e incorporação desses resíduos nas cadeias polipeptídicas nascentes. Um exemplo é a via de incorporação de selenocisteína evento cotraducional dirigido pelo códon UGA. Em bactérias, essa via conta com uma complexa maquinaria molecular composta por: Selenocisteína Sintase (SelA), Fator de Elongação Específico de Reconhecimento (SelB), Selenofosfato Sintetase (SelD), tRNA específico (SelC ou tRNAsec), sequência específica no mRNA (Sequência de Inserção de Selenocisteínas - SECIS) e Aminoacil tRNA Sintetase (aaRS). Pelo fato do selênio ter uma toxicidade elevada em ambientes celulares, é fundamental a compreensão do mecanismo catalítico e razão estequiométrica na formação dos complexos da via na etapa de incorporação junto ao tRNAsec, bem como sua caracterização estrutural foram os objetivos deste trabalho. A proteína SelA foi expressa e purificada para utilização em análises envolvendo microscopia de força atômica, microscopia eletrônica de transmissão com contraste negativo e em gelo vítreo foram realizadas nos complexos SelA e SelA-tRNAsec, visando obter um modelo estrutural e a razão estequiométrica dos complexos. A fim de compreender o mecanismo de passagem do selênio, ensaios de anisotropia de fluorescência e de microcalorimetria, corroborados pelas análises de troca de hidrogênio-deutério acoplado a espectrometria de massa e espectroscopia de infravermelho, elucidaram a formação e estequiometria do complexo ternário SelAtRNA sec-SelD. Tentativas de cristalização e análises cristalográficas também foram realizadas, no entanto, sem sucesso. Com os resultados obtidos foi possível propor que o reconhecimento de SelD e, consequentemente, a entrega do selenofosfato, seja uma etapa crucial da via de incorporação de selenocisteínas.
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2013
- Data da defesa: 14.02.2013
-
ABNT
SERRÃO, Vitor Hugo Balasco. Complexos macromoleculares da via específica de incorporação de selênio de Escherichia coli. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-20032013-091148/. Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Serrão, V. H. B. (2013). Complexos macromoleculares da via específica de incorporação de selênio de Escherichia coli (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-20032013-091148/ -
NLM
Serrão VHB. Complexos macromoleculares da via específica de incorporação de selênio de Escherichia coli [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-20032013-091148/ -
Vancouver
Serrão VHB. Complexos macromoleculares da via específica de incorporação de selênio de Escherichia coli [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 26 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-20032013-091148/ - Caracterização das interações macromoleculares das proteínas envolvidas na síntese de selenocisteínas em <i>Escherichia coli</i>
- Characterization of Schistosoma mansoni Dihydrofolate Reductase (DHFR)
- Seryl-tRNA synthetase specificity for tRNASec in bacterial sec biosynthesis
- The specific elongation factor to selenocysteine incorporation in Escherichia coli: unique tRNASec recognition and its interactions
- The specific elongation factor to selenocysteine incorporation in Escherichia coli: unique tRNASec recognition and its interactions
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