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Caracterização do proteoma nuclear de folhas de cana-de-açúcar (Saccharum spp) de 1 e 4 meses de idade (2012)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: SILVA, DANIELLE IZILDA RODRIGUES DA - ESALQ
  • Unidades: ESALQ
  • Sigla do Departamento: LGN
  • Subjects: CANA-DE-AÇÚCAR; FOLHAS (PLANTAS); PROTEÍNAS NUCLEARES
  • Keywords: Programas de predição
  • Language: Português
  • Abstract: A cana-de-açúcar é uma cultura economicamente importante, cultivada especialmente pelo seu colmo, que constitui a matéria-prima para produtos como o açúcar e o bioetanol. Ademais, a compreensão do proteoma nuclear é essencial para decifrar os mecanismos que governam a regulação gênica. No presente estudo, é demonstrado o isolamento e a identificação através de 1D SDS-PAGE de proteínas nucleares originadas de folhas jovens de plantas de cana-de-açúcar. Os núcleos foram isolados de folhas F+1 frescas de cana-de-açúcar de 1 e 4 meses, usando o protocolo modificado de Folta e Kaufman (2000). O experimento consistiu em um delineamento inteiramente casualizado, com três repetições de 18 plantas cada. Após a purificação usando o gradiente de percoll, a integridade do núcleo foi avaliada por meio da coloração com orceína acetolática 1% e com DAPI. Os resultados obtidos revelam os núcleos como esferas uniformes com o diâmetro médio de 5 ?m. As proteínas nucleares foram isoladas usando o reagente TRI Reagent (Sigma) e quantificadas por meio do método de Bradford. As análises de Western blot foram usadas para demonstrar o enriquecimento de proteínas nucleares. As membranas foram incubadas com a RUBISCO, PEPCase, OEE1, Histona e PCNA. A presença da PCNA e da Histona foram detectadas apenas no extrato de proteínas nucleares, já a RUBISCO, a PEPCase e a OEE1 foram detectadas de forma abundante no extrato de proteínas total e reduzida na fração nuclear. Para a caracterização do proteomanuclear, 60 ?g de proteínas foram separadas por SDS-PAGE e cada canaleta dividida em 20 bandas. As proteínas de cada banda foram digeridas e purificadas. A identificação foi realizada por meio de espectrometria de massas (Synapt G2 HDMS) e analisadas usando o ProteinLynx e o banco de dados SUCEST. Programas como BaCelLo, WoLF PSORT, Plant-mPloc, SherLoc e PSORT foram usados para a predição da localização subcelular das proteínas identificadas. A classe de proteínas identificadas mais abundante se relaciona à montagem de nucleossomos, e é representada principalmente pelas histonas, como H2A.2, H2A.8, H3.3, H2B.1, H2B.2, dentre outras. Ademais, ainda foram encontradas classes menos abundantes relacionadas ao metabolismo do DNA, do RNA, regulação da transcrição, dentre outras. Alguns fatores de transcrição e outras proteínas nucleares típicas também foram identificadas, porém, possivelmente em decorrência de sua baixa abundância, não foram observados em todas as repetições. Os resultados encontrados mostram a aplicabilidade da metodologia para criar um perfil preciso do proteoma nuclear de cana-de-açúcar
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.10.2012
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    How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Danielle Izilda Rodrigues da; LABATE, Carlos Alberto. Caracterização do proteoma nuclear de folhas de cana-de-açúcar (Saccharum spp) de 1 e 4 meses de idade. 2012.Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2012. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-29112012-144814/ >.
    • APA

      Silva, D. I. R. da, & Labate, C. A. (2012). Caracterização do proteoma nuclear de folhas de cana-de-açúcar (Saccharum spp) de 1 e 4 meses de idade. Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-29112012-144814/
    • NLM

      Silva DIR da, Labate CA. Caracterização do proteoma nuclear de folhas de cana-de-açúcar (Saccharum spp) de 1 e 4 meses de idade [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-29112012-144814/
    • Vancouver

      Silva DIR da, Labate CA. Caracterização do proteoma nuclear de folhas de cana-de-açúcar (Saccharum spp) de 1 e 4 meses de idade [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-29112012-144814/


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