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Manutenção in vitro da expressão do relógio cicardiano na cultura de glândula pineal submetida à estimulação diária rítmica com noradrenalina (2012)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CIPOLLA NETO, JOSE - ICB
  • Unidades: ICB
  • Subjects: FISIOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: A produção de melatonina (Mel) no período noturno é regulada principalmente pela liberação de noradrenalina (Nor) na glândula pineal que possui genes relógio que sustentam o sistema circadiano de expressão gênica. Em estudos in vitro, as glândulas são extraídas e postas em cultura por 48h e, a seguir, são, em geral, estimuladas com noradrenalina. Na tentativa de mimetizar o padrão fisiológico de liberação da Nor in vivo, tentamos desenvolver uma nova metodologia de cultura de glândula pineal na qual se faz a adição diária , periódica de noradrenalina. Para testar o caráter sincronizador da Nor nestas novas condições propostas estudamos a expressão diária dos genes relógio, comparando-a com o protocolo clássico de cultura e com a sua expressão in vivo. Foram utilizados ratos Wistar machos com peso de 150-180g. Os experimentos foram aprovados pelo CEUA, protocolo registrado sob nº 199 nas fls. 116 do livro 2. Para o estudo in vivo, as glândulas foram coletadas nos ZTs 3,6,9,12,15,18,21 e 24. Para o estudo in vitro, as glândulas foram coletadas no ZT 11 e submetidas à cultura por 72h divididas em 3 grupos: (C) controle (sem estimulação), (A) agudo (Nor 10-6 por 12h após 48h de cultura) e (T) temporizado (desde o início da cultura: 12h presença/12h ausência da Nor 10-6 até 72h de cultura). Realizou-se a análise da expressão gênica por qPCR dos genes Bmal1,Per1,Per2,Cry1,Cry2,Rev-erbα,Db p < /i> e Aanat (n=6). Os valores foram normalizados pelo gene Rpl.As glândulas dos grupos A e T foram submetidas à análise da atividade enzimática da AANAT (n=6). O meio de cultura foi coletado nas últimas 24h em intervalos de 3h para análise do conteúdo de Mel por HPLC (n=3). Para as análises estatísticas foram utilizados ANOVA de uma e duas vias e pós-teste por Bonferroni, além de teste de T-Student’s, quando adequado.A análise in vivo da expressão dos genes relógio da glândula pineal demonstrou ritmicidade em todos os genes analisados. O pico de acrofase de Bmal1, observado no ZT0, ocorreu em fase oposta aos dos genes Per1,Per2,Cry1,Cry2 e Rev-erbα. Quando as glândulas foram submetidas aos grupos C e A nenhuma variação ao longo das 24h foi observada. Já com relação ao grupo T, foi observado o padrão rítmico de expressão de todos os genes analisados; o pico de acrofase do gene Bmal1 foi no ZT12, ocorrendo em fase oposta aos genes Per1,Cry1 e Cry2. As acrofases de Per2 e de Rev-erbα apresentaram valores de acrofase similares ao de Bmal1. A expressão do RNAm da Aanat dos grupos A e T mostrou uma correlação com o padrão de estimulação com Nor, apresentando virtualmente os mesmos valores. A atividade enzimática da AANAT mostrou-se maior no grupo T quando comparado com grupo A. A temporização melhorou a sensibilidade da glândula à Nor, refletindo em uma síntese maior de Mel em relação ao grupo A. A temporização foi capaz de reestabelecer a expressão rítmica de componentes do relógio circadiano da glândula pineal, aumentando a atividade da AANAT e a sensibilidade da glândula à noradrenalina, refletindo-se no aumento da síntese de melatonina.
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  • Source:
  • Conference title: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (FeSBE)

  • How to cite
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    • ABNT

      SILVA, J. A. D.; GARCIA, R. A. P.; CIPOLLA-NETO, José. Manutenção in vitro da expressão do relógio cicardiano na cultura de glândula pineal submetida à estimulação diária rítmica com noradrenalina. Anais.. São Paulo: FeSBE, 2012.
    • APA

      Silva, J. A. D., Garcia, R. A. P., & Cipolla-Neto, J. (2012). Manutenção in vitro da expressão do relógio cicardiano na cultura de glândula pineal submetida à estimulação diária rítmica com noradrenalina. In Resumos. São Paulo: FeSBE.
    • NLM

      Silva JAD, Garcia RAP, Cipolla-Neto J. Manutenção in vitro da expressão do relógio cicardiano na cultura de glândula pineal submetida à estimulação diária rítmica com noradrenalina. Resumos. 2012 ;
    • Vancouver

      Silva JAD, Garcia RAP, Cipolla-Neto J. Manutenção in vitro da expressão do relógio cicardiano na cultura de glândula pineal submetida à estimulação diária rítmica com noradrenalina. Resumos. 2012 ;


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