Proteômica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagênese (2012)
- Authors:
- Autor USP: GIMENEZ, MARCELA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: NEOPLASIAS CEREBRAIS; ASTRÓCITOS; PROTEÍNAS (IDENTIFICAÇÃO)
- Language: Português
- Abstract: Os gliomas somam mais de 70% de neoplasias do sistema nervoso central. Gliomas de baixo grau apresentam uma tendência para progredir para fenótipos mais malignos sendo que os mais frequentes e agressivos compreendem os glioblastomas (GBM). Em estudos prévios, baseados em eletroforese bidimensional e espectrometria de massas, nós reportamos que a proteína nucleofosmina (NPM) estava aumentada em GBMs, quando comparados com tumores astrocíticos de graus II e III e tecido cerebral não neoplásico. NPM é uma fosfoproteína nucleolar relacionada à apoptose, biogênese dos ribossomos, mitose e reparo do DNA, que possui expressão alterada em câncer. Neste trabalho foram realizados estudos utilizando silenciamento gênico de NPM por RNA de interferência (siRNA) em células U87MG derivadas de GBM. Ensaios funcionais foram realizados para estudar o papel de NPM nas células transfectadas com siRNA-NPM. Os efeitos biológicos do silenciamento de NPM foram a diminuição de formação de colônias e a sensibilizarão para morte celular induzida pelo agente quimioterápico temozolomida. Com o objetivo de entender as alterações moleculares das células silenciadas, a análise proteômica foi realizada em células U87MG transfectadas com siRNA-NPM no 7° dia, onde foi verificado a diminuição de até 80% no nível protéico e de RNA mensageiro de NPM. Extratos protéicos de células U87MG transfectadas siRNA-NPM, U87MG parental e U87MG tratada com oligonucleotídeos sem qualquer homologia (NTC) foram digeridos com tripsina. Os peptídeos foram marcados com iTRAQ, separados por cromatografia líquida e analisados por espectrometria de massas (ESIQ-TOF-MS). Das proteínas identificadas como diferencialmente expressas, quatro estavam aumentadas nas células com NPM silenciada e 14 proteínas apresentaram expressão diminuída, em comparação com células controle. Análise por antologia das proteínas identificadasrevelou que 6 delas estão envolvidas na regulação da apoptose (ENPL_HUMAN, ITCH_HUMAN, 1433Z_HUMAN, GRP78_HUMAN, AClN4_HIJMAN, LMNA_HUMAN). Dentre elas, destacou-se a proteína GRP78 que apresentou uma expressão reduzida nas células silenciadas. GRP78 é uma proteína envolvida com resposta ao estresse no retículo endoplasmático, processos anti-apoptóticos e quimioresistência em câncer. Com o objetivo de estender os estudos de NPM na gliomagênese, foram realizados estudos proteômicos em amostras de tecidos comparando-se amostras obtidas de tecido cerebral não tumoral, astrocitoma grau II, GBM com curta ou sobrevida longa dos pacientes após diagnóstico, oligodendroglioma grau II e oligodendroglioma grau III. Foi utilizada marcação com iTRAQ para quantificação das proteínas que foram identificadas em espectrômetro de massas LTQ Orbitrap Veios. Um total de 1095 proteínas marcadas com iTRAQ foi identificado, das quais 268 apresentaram diferença de expressão maior ou menor que duas vezes, em pelo menos um grupo analisado, em relação ao grupo referência (tecido não neoplásico). Algumas proteínas que apresentaram correlação com malignidade dos tumores foram selecionadas para validação por western blot, sendo elas HSPB 1_HUMAN, GRP94_HUMAN, IDH1_HUMAN, NPM HIJMAN, RKIP_HUMAN, NUCL_HUMAN, NOVA-1_HUMAN, ASAH HUMAN e LGALS3BP HUMAN. NPM foi encontrada aumentada em GBM e oligodendrogliomas, o que sugere uma participação importante dessa proteína no processo de tumorigênese. Outras proteínas, como HSPB1 foi detectada como aumentada em glioblastoma de sobrevida curta, sugerindo sua participação nesse fenótipo mais agressivo e de pior prognóstico. A proteína NOVA1 foi associada com GBMs e oligondrogliomas grau III. 0 conjunto dos resultados obtidas indicou uma participação de NPM na tumorigênese dos gliomas, sugerindo que NPM pode ser considerado um alvo para desenvolvimento de novas drogas para terapia em gliomas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2012
- Data da defesa: 13.02.2012
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ABNT
GIMENEZ, Marcela. Proteômica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagênese. 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2012. . Acesso em: 28 abr. 2025. -
APA
Gimenez, M. (2012). Proteômica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagênese (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Gimenez M. Proteômica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagênese. 2012 ;[citado 2025 abr. 28 ] -
Vancouver
Gimenez M. Proteômica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagênese. 2012 ;[citado 2025 abr. 28 ]
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