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Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: IWASHITA, CLAUDIA - BIOTECNOLOGIA
  • Unidade: BIOTECNOLOGIA
  • Subjects: PLASMA; CROMATOGRAFIA LÍQUIDA; FATORES DE COAGULAÇÃO SANGUÍNEA; PROTEÍNAS
  • Language: Português
  • Abstract: Neste trabalho estudou-se a purificação de fator VIII de coagulação (FVIII) e da Proteína C (PC) por cromatografia. Em coluna ANX Sepharose FF como primeira etapa de purificação do plasma permite a eluição do FVIII e da PC com bom fator de purificação, mas não a separação destas. Propomos a separação de FVIII e PC empregando cromatografia de afinidade a metal (IMAC) empregando Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ e Fe3+ e dessorção empregando imidazol, cloreto de amônio e variação de pH. Em colunas de Fe3+ e Ni2+ as proteínas praticamente não se ligaram à resina. Em IMAC-Co2+, a PC não é adsorvida pela resina enquanto o FVIII pode ser eluído com imidazol 100 mM. Em IMAC-Cu2+ a PC eluiu com imidazol 10mM e o FVIII com 200mM. Não foi possível eluir as proteínas nem com NH4Cl 1M nem quando o pH foi abaixado até 4,0. Em IMAC-Zn2+ a PC não é adsorvida e o FVIII eluiu com imidazol 200mM ou NH4Cl 1M. Diminuindo-se o pH, a recuperação da atividade do FVIII foi baixa. Concluímos que IMAC-Co2+ apresentou os melhores rendimentos e melhores fatores de purificação para as 2 protéinas.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 19.03.2012
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      IWASHITA, Claudia; CHENG, Elizabeth. Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida. 2012.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-01062012-111458/pt-br.php >.
    • APA

      Iwashita, C., & Cheng, E. (2012). Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-01062012-111458/pt-br.php
    • NLM

      Iwashita C, Cheng E. Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-01062012-111458/pt-br.php
    • Vancouver

      Iwashita C, Cheng E. Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-01062012-111458/pt-br.php

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