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Tese

Estudo do sistema BlaR/BlaI e de dois operons codificando sistemas de efluxo RND em Caulobacter crescentus (2012)

  • Authors:
  • Autor USP: MORANTE, ESTELA YNÉS VALENCIA - Interunidades em Biotecnologia
  • Unidade: Interunidades em Biotecnologia
  • Subjects: CÁDMIO; REGULAÇÃO GÊNICA; GENÉTICA BACTERIANA; ZINCO; ATIVAÇÃO ENZIMÁTICA
  • Keywords: CAULOBACTER; GENÔMICA FUNCIONAL
  • Language: Português
  • Abstract: O presente trabalho tem como objetivo caracterizar três agrupamentos de genes da alfa proteobactéria Caulobacter crescentus envolvidos na resposta a metais e antibióticos. Analisamos o agrupamento composto pelos genes CC1637-CC1640, que contém um sistema BlaR/BlaI de transdução de sinal, e realizamos uma análise comparativa de dois sistemas de efluxo da família RND composto pelos genes CC2720-CC2725 e CC2388-CC2390 que estariam envolvidos na resposta a metais cádmio e zinco. Mutantes simples e duplos com deleção em fase foram obtidos, e o estudo da atividade promotora foi realizado através de ensaio de β-galactosidase utilizando gene repórter lacZ . Ensaios de RT-PCR e atividade β-galactosidase mostraram que o gene CC1638 provavelmente não possui promotor próprio e que os genes CC1637- CC1640 podem consituir um operon. A atividade promotora do gene CC1640 não responde a H2O2, Cd2+ e Zn2+, mas a linhagem ∆CC1640 apresentou baixa viabilidade na presença de Cd2+. As linhagens ∆CC1637 e ΔCC1638 mostraram sensibilidade a t-butil-hidroperóxido. A linhagem ∆CC1640 mostrou-se sensível aos antibióticos CTX e PPT, e ensaios de β-galactosidase em placa e em meio liquido mostraram indução da expressão pelos antibióticos CTX e CFE. Observamos uma auto-regulação do operon pela proteína codificada pelo gene CC1640 (BlaI), confirmado por ensaios de EMSA. A presença de BlaR inibe a ligação da proteína BlaI ao promotor, sugerindo que ambas BlaI/BlaR regulem em conjunto o promotor do gene CC1640. Análise in silico do consenso TTACGNNCGTAA localizado no promotor de CC1640 identificou esta sequência na região promotora de outros genes. A análise da expressão relativa sugere que os genes CC1568, CC1230 e CC2661 são regulados pela proteína BlaI, sugerindo que BlaI regula a expressão de outros genes possivelmente envolvidos na resposta a antibióticos β-lactâmicos.Ensaios de atividade β-galactosidase da região intergênica CC2720-CC2721 mostraram que esta não possui atividade promotora, e análise por RT-PCR confirmou que os genes CC2720-CC2721 são co-transcritos e que fazem parte do operon CC2720-CC2725. A expressão do operon mostrou indução significativa na presença de Cd2+, moderada indução na presença de Zn2+ e Co2+, e pouca indução na presença de Ni2+. A expressão do operon CC2388-CC2390 é altamente induzida na presença de níquel e cobalto, não é induzida por cádmio e moderadamente induzida por zinco. A linhagem ΔCC2724 não é sensível a zinco, cobalto ou níquel. A linhagem ΔCC2390 é sensível a cobalto, pouco sensível a níquel e não sensível a zinco, e ambas as linhagens foram sensíveis a cádmio. A obtenção do duplo mutante, assim como sua complementação, foram realizadas, e os resultados sugerem que se trata de dois sistemas de efluxo com diferentes respostas a metal.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 27.04.2012
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      MORANTE, Estela Ynês Valência. Estudo do sistema BlaR/BlaI e de dois operons codificando sistemas de efluxo RND em Caulobacter crescentus. 2012. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-04062012-105252/. Acesso em: 31 dez. 2025.

    • APA

      Morante, E. Y. V. (2012). Estudo do sistema BlaR/BlaI e de dois operons codificando sistemas de efluxo RND em Caulobacter crescentus (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-04062012-105252/

    • NLM

      Morante EYV. Estudo do sistema BlaR/BlaI e de dois operons codificando sistemas de efluxo RND em Caulobacter crescentus [Internet]. 2012 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-04062012-105252/

    • Vancouver

      Morante EYV. Estudo do sistema BlaR/BlaI e de dois operons codificando sistemas de efluxo RND em Caulobacter crescentus [Internet]. 2012 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-04062012-105252/

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