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Clonagem, expressão heteróloga e caracterização da proteína de escolta da Hsp70 de Leishmania braziliensis (2011)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, SABRINA MATOS DE OLIVEIRA DA - IQSC
  • Unidade: IQSC
  • Sigla do Departamento: QFM
  • Subjects: LEISHMANIA BRASILIENSIS; PROTEÍNAS DO CHOQUE TÉRMICO
  • Language: Português
  • Abstract: A Leishmaniose é uma doença infecciosa causada por protozoários flagelados do gênero Leishmania, transmitidos principalmente pela picada das fêmeas dos insetos Lutzomyia migonei, L. fischerie e L. whitmani. Os parasitas como a Leishmania braziliensis, sofrem várias mudanças morfológicas durante seu ciclo de vida, incluindo a troca de organismo hospedeiro. Durante essas mudanças, proteínas de choque térmico ou chaperones moleculares, como, por exemplo, a Hsp70, são expressas em grande quantidade. Isso é um indício de que essa classe de proteínas é fundamental para modificações morfológicas do parasita. A função dessas proteínas é auxiliar no processo de enovelamento protéico, no transporte de proteínas entre as membranas e em muitas outras importantes funções celulares. A Hsp70 é auxiliada por varias outras proteínas denominadas co-chaperone dentre elas a Hep1. Essa co-chaperone tem seu papel descrito principalmente em mitocôndrias como estabilizadoras da Hsp70 prevenindo a sua agregação. O objetivo deste trabalho foi clonar, expressar, purificar e caracterizar as proteínas Hsp70 e Hep1 de Leishmania braziliensis (LbHsp70 e LbHep1). Os ensaios preliminares mostraram que a LbHsp70 foi expressa de forma insolúvel, sendo necessário expressar a proteína em corpos de inclusão para tentativa de reenovelamento, afim de obter a mesma na fração solúvelApesar da LbHsp70 se apresentar na fração solúvel após o reenovelamento, a mesma foi purificada como agregado. Ainda na tentativa de obter a LbHsp70 na forma solúvel, a mesma foi co-expressa com a LbHep1 (expressa na forma solúvel), porém a proteína de interesse continuou na fração insolúvel do lisado bacteriano. Como a LbHep1 não apresentou a atividade esperada quando co-expressa com a LbHsp70, foram feitos então ensaios de co-expressão da LbHep1 com a Hsp70 mitocondrial humana, que é heterologamente expressa na forma de agregados, com o intuito de confirmar a atividade estabilizadora das Hep1 sobre proteínas da classe Hsp70. Este experimento possibilitou a obtenção de ambas as proteínas na fração solúvel, indo de acordo com os dados apresentados na literatura para este sistema em outros organismos. Uma vez mostrada à funcionalidade da LbHep1, foi feita a caracterização desta proteína por métodos biofísicos como dicroísmo circular, espectrometria de fluorescência, cromatografia de exclusão molecular analítica e ultracentrifugação analítica
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 17.08.2011

  • How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Sabrina Matos de Oliveira da; BORGES, Júlio César. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização da proteína de escolta da Hsp70 de Leishmania braziliensis. 2011.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2011.
    • APA

      Silva, S. M. de O. da, & Borges, J. C. (2011). Clonagem, expressão heteróloga e caracterização da proteína de escolta da Hsp70 de Leishmania braziliensis. Universidade de São Paulo, São Carlos.
    • NLM

      Silva SM de O da, Borges JC. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização da proteína de escolta da Hsp70 de Leishmania braziliensis. 2011 ;
    • Vancouver

      Silva SM de O da, Borges JC. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização da proteína de escolta da Hsp70 de Leishmania braziliensis. 2011 ;

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