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Caracterização molecular e funcional do Ativador do Proteassoma 20S (PA28) em Schistosoma mansoni (2011)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: SOARES, CLÁUDIA SOSSAI - FMRP
  • Unidades: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: SCHISTOSOMA MANSONI; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
  • Language: Português
  • Abstract: PA28 é um Ativador do Proteassoma 20S envolvido na degradação seletiva de peptídeos não ubiquitinados em todos os sistemas celulares eucarióticos, mas mostrou-se não degradar grandes proteínas poliubiquitinadas. A subunidade PA28-gama (‘gama’) do ativador do proteassoma está associada principalmente com a regularão da proliferação e crescimento celular. No presente estudo, nós identificamos e caracterizamos um cDNA e uma proteína de Schistosoma mansoni exibindo homologia significante com PA28’gama’ de diversar taxonomias extendendo de mamíferos a invertebrados simples. Designado SmPA28’gama’, este transcrito possui uma ORF predita de 753 pb codificando uma proteína de 250 aminoácidos. Alinhamento de SmPA28’gama’ com múltiplos ortólogos de PA28’gama’ revelou uma média de similaridade de ~40% entre os organismos investigados, e 90% de similaridade com PA28’gama’ de Schistosoma japonicum. Além disso, análise filogenética demonstrou SmPA28’gama’ sendo ligada próxima a seus grupos irmãos que contêm sequências PA28’gama' em caracterizadas de Drosophila melanogaster, Dictyostelium discoideum, e SmPA28’gama’ divide o mesmo ramo com PA28’gama’ de S. japonicum. Esta proteína SmPA28’gama’ (ou SmPA28/2) foi expressa em vetar pET-46 Ek/LIC, revelando um peso molecular de ~24 KDa. Além disso, nós expressamos a porção C-terminal da ORF de SmPA28’gama’, denominada como SmPA28/1 (~16 KDa), a fim de produzir em galinha um anticorpo policlonal anti-SmPA28’gama’. O perfil de expressão de SmPA28’gama’ utilizando PCR quantitativo em tempo real revelou elevado nível de transcritos em ovos, miracídios e vermes adultos pareados quando comparados aos outros estágios. Dado sua conhecida função regulatória em outros organismos, nós hipotetizamos que o alto nível de SmPA28’gama’ nesses estágios de S. mansoni pode estar correlacionado com um importante papel de PA28’gama’no crescimento e desenvolvimento deste parasita. Então, a fim de obter um melhor entendimento da função de SmPA28’gama’, nós permitimos que miracídios fossem transformados em esporocistos na presença de RNA interferente de dupla fita (dsRNA) para o gene SmPA28’gama’ e cultivados por 4 dias, depois desse tempo níveis de transcritos e mudanças fenotípicas foram avaliados. O tratamento com SmPA28’gama’-dsRNA resultou no bloqueio genético de -60%, que foi correlacionado com uma diminuição Dignificante do comprimento larval comparado aos seus controles. Esses achados são consistentes com uma função putativa de SmPA28’gama’ no crescimento/desenvolvimento de S. mansoni. Além disso, nós observamos um aumento do mRNA e da proteína SmPA28’gama’, e uma diminuição do mRNA SmRpn10 em S. mansoni tratados com o inibidor MG-132. Por outro lado, em S. mansoni tratados com a droga Curcumin, nós observamos uma diminuição tanto no mRNA quanto na proteína SmPA28’gama’ que foram correlacionados com uma diminuição Dignificante do comprimento larval comparado com o controle DMSO
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.02.2011

  • How to cite
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    • ABNT

      SOARES, Cláudia Sossai; RODRIGUES, Vanderlei. Caracterização molecular e funcional do Ativador do Proteassoma 20S (PA28) em Schistosoma mansoni. 2011.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011.
    • APA

      Soares, C. S., & Rodrigues, V. (2011). Caracterização molecular e funcional do Ativador do Proteassoma 20S (PA28) em Schistosoma mansoni. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Soares CS, Rodrigues V. Caracterização molecular e funcional do Ativador do Proteassoma 20S (PA28) em Schistosoma mansoni. 2011 ;
    • Vancouver

      Soares CS, Rodrigues V. Caracterização molecular e funcional do Ativador do Proteassoma 20S (PA28) em Schistosoma mansoni. 2011 ;

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