Atividade de mieloperoxidase e produção de oxigênio singlete em neutrófilos e células monocíticas (2010)
- Authors:
- Autor USP: CRUZ, WILTON ANTONIO DA SILVA - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Subjects: BIOQUÍMICA CLÍNICA; NEUTRÓFILOS; PEROXIDASE; IMUNOLOGIA CELULAR
- Language: Português
- Abstract: A enzima mieloperoxidase (MPO), presente em leucócitos da linhagem granulocítica e monocítica, tem papel fundamental na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO). Existem fortes evidências que alguns produtos gerados a partir de reações catalisadas por mieloperoxidase (MPO) tenham papel na sinalização celular. Dentre estes produtos, chama atenção o oxigênio singlete (´ANTPOT.1´O´IND.2´). Em fagócitos, esta ERO poderia participar tanto do processo de morte de patógenos, quanto da sinalização de eventos da inflamação. O nosso grupo de pesquisa trabalha com a hipótese de que a localização da MPO, e consequentemente, os sítios de produção de ANTPOT.1´O´IND.2´ definem a função da enzima e do ´ANTPOT.1´O´IND.2´. O interesse particular no ´ANTPOT.1´O´IND.2´ deve-se também ao fato de que sua detecção não é trivial e relativamente pouco é conhecido sobre sua produção por sistemas biológicos se comparado a outras EROs. Neste estudo trabalhamos com a questão da localização de MPO em neutrófilos e monócitos humanos e com a detecção de ´ANTPOT.1´O´IND.2´ através da utilização de sondas específicas. Nos experimentos realizados avaliamos a produção de ´ANTPOT.1´O´IND.2´ pela utilização da sonda 9,10 difenilantraceno (DPA) e também empregando o éster 9,10-antracenil-3-bispropionato de etila (ABPE) como captador de ´ANTPOT.1´O´IND.2´. Apesar da proposta de uso do DPA revestindo partículas a serem fagocitadas ter sido feita anteriormente (Garcia F., mestrado concluído em 2006) houve dificuldades na utilização desta técnica que foram reconsideradas neste trabalho. Com esta sonda tambémobtivemos imagens em microscopia confocal, através da fluorescência do DPA e perda desta fluorescência após reação com ´ANTPOT.1´O´IND.2´. As análises dos resultados com a microscopia confocal em neutrófilos confirmam que ´ANTPOT.1´O´IND.2´ está sendo realmente formado no fagolissosomo, quando as células são ativadas por partículas opsonizadas. Em monócitos também houve a possibilidade de utilizar DPA como sonda para ´ANTPOT.1´O´IND.2´. Neste caso observamos um decréscimo mais lento da fluorescência quando comparado com neutrófilos e também um apagamento mais difuso da sonda. Acreditamos que as diferenças observadas, na formação de ´ANTPOT.1´O´IND.2´, para neutrófilos e mononucleares em microscopia confocal podem ser devido a diferentes formas de compartimentalização da enzima nestes dois tipos celulares. É possível que isto tenha uma função biológica específica, uma vez que, ´ANTPOT.1´O´IND.2´ parece ser um importante sinalizador no processo inflamatório. Dado o interesse na detecção de ´ANTPOT.1´O´IND.2´ em células do sistema imune, também utilizamos uma nova sonda, o éster 9,10-antracenil-3-bispropionato de etila (ABPE). A detecção neste caso é feita pelo monitoramento de um endoperóxido por HPLC. Os resultados obtidos com essa nova sonda demonstram-se mais satisfatórios quando comparados ao DPA, permitindo uma melhor detecção da produção de ´ANTPOT.1´O´IND.2´ por fagócitos
- Imprenta:
- Data da defesa: 09.09.2010
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ABNT
CRUZ, Wilton Antonio da Silva. Atividade de mieloperoxidase e produção de oxigênio singlete em neutrófilos e células monocíticas. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-28012011-112925/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Cruz, W. A. da S. (2010). Atividade de mieloperoxidase e produção de oxigênio singlete em neutrófilos e células monocíticas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-28012011-112925/ -
NLM
Cruz WA da S. Atividade de mieloperoxidase e produção de oxigênio singlete em neutrófilos e células monocíticas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-28012011-112925/ -
Vancouver
Cruz WA da S. Atividade de mieloperoxidase e produção de oxigênio singlete em neutrófilos e células monocíticas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-28012011-112925/
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