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Caracterização funcional do gene VRP1 em Candida albicans (2011)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: DIAS, MARCOS VINICIOS SALLES - FMRP
  • Unidades: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: CANDIDA ALBICANS; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
  • Language: Português
  • Abstract: Candida albicans é um fungo comensal que passa a se comportar como patógeno em indivíduos imunocomprometidos, sendo uma das principais causas de mortalidade por infecções fúngicas em hospitais. Esse microorganismo é capaz de crescer em diferentes estados morfogenéticos e a transição da forma de levedura para a forma de hifas é um importante fator de virulência. O citoesqueleto de actina tem um papel chave na morfogênese e na formação das hifas. Na análise funcional de novos genes é muito importante saber a localização subcelular da proteína codificada. Desenvolvemos um transposon nesse trabalho derivado do transposon bacteriano Tn5 para gerar fusões com GFP em proteínas não caracterizadas de Candida albicans. Nós usamos um grupo de 19 genes não caracterizados em C. albicans, cujos homólogos em S. cerevisiae estão envolvidos na organização do citoesqueleto de actina, como alvo para reações de transposição in vitro utilizando o transposon Tn5-CaGFP-SAT1-FLP. Obtivemos uma inserção in-frame no gene VRP1. A análise da fluorescência da proteína de fusão VRP1-GFP tanto em leveduras quanto em hifas de C. albicans mostra uma distribuição pontuada na periferia celular e essa localização é dependente da carreta organização do citoesqueleto cortical de actina. Para ampliar a caracterização funcional desse gene nós deletamos ambos os alelos do gene VRP1 de C. albicans. A linhagem homozigota gerada mostra uma série de defeitos morfológicos associados com a desorganização do citoesqueleto de actina. As células leveduriformes têm problemas de citocinese permanecendo unidas em agregados celulares. Em condições indutoras de hifas as células têm uma forte redução da filamentação e uma grande proporção de células de pseudo-hifas tanto em meio líquido quanto em meio sólido. As células da linhagem mutante também exibiram defeitos na endocitose do marcador FM4-64 evidenciado pelo fragmentaçãode vacúolos. Adicionalmente foi observado também defeitos na seleção do sítio de brotamento e sensibilidade ao sal e à componentes que perturbam a membrana ou a parede celular. Através de estudos de expressão gênica verificamos que na ausência de Vrpl há uma desregulação de algumas vias importantes para a transição levedura-hifa além da ausência de indução dos genes específicos de hifas HWP1 e HGC1. Nossos resultados demonstram que Vrp1p é uma proteína requerida para o crescimento polarizado e morfogênese em Candida albicans
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 02.02.2011

  • How to cite
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    • ABNT

      DIAS, Marcos Vinicios Salles; COELHO, Paulo Sérgio Rodrigues. Caracterização funcional do gene VRP1 em Candida albicans. 2011.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011.
    • APA

      Dias, M. V. S., & Coelho, P. S. R. (2011). Caracterização funcional do gene VRP1 em Candida albicans. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Dias MVS, Coelho PSR. Caracterização funcional do gene VRP1 em Candida albicans. 2011 ;
    • Vancouver

      Dias MVS, Coelho PSR. Caracterização funcional do gene VRP1 em Candida albicans. 2011 ;


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