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Identificação e análise funcional de interações proteína-proteína do sistema de secreção do tipo III do Xanthomonas axonopodis pv (2010)

  • Authors:
  • Autor USP: CAPPELLETTI, PAOLA ALEJANDRA - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: PROTEÍNAS RECOMBINANTES (ANÁLISE); XANTHOMONAS (PESQUISA); DOENÇAS DE PLANTAS; FITOPATÓGENOS
  • Language: Português
  • Abstract: O cancro cítrico é considerado na atualidade uma das doenças mais perigosas e prejudiciais à citricultura brasileira e mundial, devido aos danos causados na produção e qualidade dos frutos, sendo a Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) a bactéria fitopatogênica responsável por tais prejuízos. Nosso laboratório iniciou estudos de identificação e análise funcional das interações proteína-proteína de Xac envolvendo sistemas importantes para sua patogenicidade (Alegria et. al., 2004). Nosso objetivo principal foi o estudo funcional e fisiológico de interações já identificadas entre proteínas do sistema de secreção do tipo III (T3SS) da Xac. O foco de nossa pesquisa foi tentar desvendar a importância biológica, na patogenicidade de Xac, das interações proteína-proteína: HrpB2-HrcU; HpaA-HpaB-HrcV; HrpD6-HrpB1- HrpW. Com este intuito clonamos, expressamos e purificamos as proteínas recombinantes. Produzimos soros policlonais específicos contra cada uma das proteínas citadas acima. Estudamos a interação entre as proteínas in vitro por meio de técnicas como Far-Western Blot, Pull Down, fluorescência e dicroísmo circular. Outro enfoque do nosso trabalho foi monitorar a contribuição individual destas proteínas no desenvolvimento da doença in planta. Para isso produzimos cepas de Xac mutantes para os genes hrpB2, hrcU, hpaA, hpaB, hrpB1 e hrpG. Os nocautes não polares foram infiltrados em plantas de laranja pêra, assim como também as cepas de complementação correspondentes, e assimfoi testada a habilidade de desenvolver o cancro cítrico e/ou reverter os sintomas da doença. Também foi monitorada a capacidade de multiplicação e sobrevida in planta das cepas Xac ∆hrpB2, ∆hrcU e ∆hpaB, assim como a secreção das proteínas HrpB2 e HpaA pelo T3SS de Xac. Estudamos com mais detalhe a possível função de HrpB2 no T3SS de Xac, desenvolvendo experimentos para determinar a região da proteína imprescindível para sua função permanecer inalterada. Realizamos mutações sítio dirigidas, a fim de introduzir códons de terminação em diferentes regiões da proteína e testar a habilidade desses fragmentos de reverter os sintomas da doença na planta. Monitoramos a capacidade de proteínas mutantes de reverter fenótipos de patogenicidade em citrus, ausentes na cepa Xac ∆hrpB2 e revertidos na cepa de complementação Xac ∆hrpB2+pUFR047_hrpB2. Desta maneira, determinamos que os últimos seis aminoácidos de HrpB2 estão envolvidos no desenvolvimento da/s função/ões em Xac
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.07.2010
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      CAPPELLETTI, Paola Alejandra; FARAH, Chuck Shaker. Identificação e análise funcional de interações proteína-proteína do sistema de secreção do tipo III do Xanthomonas axonopodis pv. 2010.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08112010-101336/ >.
    • APA

      Cappelletti, P. A., & Farah, C. S. (2010). Identificação e análise funcional de interações proteína-proteína do sistema de secreção do tipo III do Xanthomonas axonopodis pv. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08112010-101336/
    • NLM

      Cappelletti PA, Farah CS. Identificação e análise funcional de interações proteína-proteína do sistema de secreção do tipo III do Xanthomonas axonopodis pv [Internet]. 2010 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08112010-101336/
    • Vancouver

      Cappelletti PA, Farah CS. Identificação e análise funcional de interações proteína-proteína do sistema de secreção do tipo III do Xanthomonas axonopodis pv [Internet]. 2010 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-08112010-101336/

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