A semi-nested RT-PCR assay targeted to hemagglutinin-esterase gene of Bovine Coronavirus (2010)
- Authors:
- USP affiliated authors: RICHTZENHAIN, LEONARDO JOSÉ - FMVZ ; BRANDÃO, PAULO EDUARDO - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Subjects: CORONAVIROSE BOVINA; DIVERSIDADE GENÉTICA; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Language: Inglês
- Abstract: O coronavírus bovino (BCoV) é um vírus RNA simples fita, de sentido positivo, não segmentado com envelope constituído de uma camada dupla de lipídios com quatro proteínas (HE, S, E e M) que resultam no aspecto de coroa dos vírions. Como a HE (hemaglutinina-esterase) é uma proteína polimórfica com uma função de receptor aglutinante secundária, estudos sobre a diversidade do gene HE podem possibilitar maiores informações sobre a evolução e interação hospedeiro-parasita do BCoV. Uma reação de hemi-nested RT-PCR foi desenvolvida para a amplificação de um produto de 441pb do gene HE do BCoV (nt 543 ao 562). Temperaturas ótimas de hibridização foram testadas em um termociclador com gradiente para a reação de hemi-nested e utilizada no protocolo final. A sensibilidade analítica foi determinada por meio da diluição serial na base 10 do BCoV amostra Kakegawa (título HA: 256) em uma suspensão fecal negativa para BCoV, resultando positiva até a diluição de 10-6, mostrando uma alta sensibilidade analítica sem inibição na PCR. O protocolo final da hemi-nested RT-PCR foi aplicado a 21 amostras fecais de vacas previamente positivas para BCoV e o sequenciamento de DNA do produto de 441pb de 14 amostras resultaram em sequências com elevado escore do gene HE do BCoV após a análise no BLAST/n. Essa hemi-nested RT-PCR é uma ferramenta poderosa para estudos de diversidade filogenética de linhagens de campo de BCoV e para estudos comparativos entre os diferentes genes dos Coronavírus
- Imprenta:
- Source:
- Título do periódico: Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science
- ISSN: 1413-9596
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 47, n. 4, p. 323-328, 2010
-
ABNT
SOUZA, Sibele Pinheiro de; ASANO, Karen Miyuki; VILLARREAL BUITRAGO, Laura Yaneth; et al. A semi-nested RT-PCR assay targeted to hemagglutinin-esterase gene of Bovine Coronavirus. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, São Paulo, v. 47, n. 4, p. 323-328, 2010. Disponível em: < http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/26832/28615 >. -
APA
Souza, S. P. de, Asano, K. M., Villarreal Buitrago, L. Y., Silva, S. O. de S., Richtzenhain, L. J., & Brandão, P. E. (2010). A semi-nested RT-PCR assay targeted to hemagglutinin-esterase gene of Bovine Coronavirus. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 47( 4), 323-328. Recuperado de http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/26832/28615 -
NLM
Souza SP de, Asano KM, Villarreal Buitrago LY, Silva SO de S, Richtzenhain LJ, Brandão PE. A semi-nested RT-PCR assay targeted to hemagglutinin-esterase gene of Bovine Coronavirus [Internet]. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science. 2010 ; 47( 4): 323-328.Available from: http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/26832/28615 -
Vancouver
Souza SP de, Asano KM, Villarreal Buitrago LY, Silva SO de S, Richtzenhain LJ, Brandão PE. A semi-nested RT-PCR assay targeted to hemagglutinin-esterase gene of Bovine Coronavirus [Internet]. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science. 2010 ; 47( 4): 323-328.Available from: http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/26832/28615 - Molecular analysis of Brazilian strains of bovine coronavirus (BCoV) reveals a deletion within the hypervariable region of the S1 subunit of the spike glycoprotein also found in human coronavirus OC43
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