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Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 isoladas da peçonha da serpente (2009)

  • Authors:
  • USP affiliated author: RUEDA, ARISTIDES QUINTERO - FCFRP
  • School: FCFRP
  • Sigla do Departamento: S/D
  • Subjects: SERPENTES; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; FOSFOLIPASES A; INFLAMAÇÃO; TOXICOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: Os envenenamentos causados pelas serpentes do gênero Bothrops são os mais importantes do ponto de vista médico e econômico na América Central. Dentre estas, a serpente Bothrops asper é responsável por 90% dos envenenamentos ofídicos registrados no Panamá anualmente. Apesar da relevância médica e econômica, só a peçonha de populações de B. asper da Costa Rica e Guatemala tem sido estudadas em detalhes. Neste trabalho apresentamos a caracterização da peçonha da B. asper do Panamá e o isolamento, a caracterização funcional e estrutural de quatro fosfolipases A2 básicas denominadas MTX-I, MXT-II, MTX-III e MXT-IV e de uma fosfolipase A2acídica denominada Basp-I-PLA2. As fosfolipases A2 foram isoladas da peçonha em duas etapas usando cromatografia de troca iônica em CM-Sepharose (0,05 M NH4HCO3 pH 8,1), e cromatografia hidrofóbica em Fenil-Sepharose (0,05 M Tris-HCl pH 7,4) seguida de gradiente de concentração de 4 a 0 M NaCl no mesmo tampão a temperatura ambiente (25°C). A isoforma acídica demonstrou maior atividade catalítica que as isoformas básicas, quando atuou sobre fosfatidilcolina e fosfatidilglicerol. A focalização isoelétrica evidencia pIs de 8,1 a 8,3 para as MTXs e 4,6 para isoforma Basp-I-PLA2. A determinação da massa molecular por espectrometria de massa mostrou que MTX-1 14,156.5; MTX-2 14,249.5 e MTX-3 14,253.0 e Basp-I-PLA2 14,246.0 Da. As PLA2s (MTX-I, II, III e IV) induziram atividade miotóxica, reação inflamatória com migração de leucócitos ao músculo e ativação de macrófagos para exercer fagocitose e produção de superóxido. MTX-II exerceu um forte efeito citotóxico contra células tumorais JURKAT, C. albicans e E. coli. A fosfolipase A2 acídica, testada no plasma enriquecido com plaquetas, mostrou potente efeito inibitório na agregação plaquetária induzida pela ADP e colágeno. A análise de seqüência N- terminal demonstrou que asproteínas MTX-I, MTX-III e Basp-I-PLA2 pertencem à subclasse de fosfolipases A2 Asp49 cataliticamente ativas, enquanto que, MTX-II e MTX-IV pertencem à subclasse de fosfolipases A2 Lys49-homólogas cataliticamente inativas. Além disso, a sequência N-terminal das fosfolipases A2 básicas isoladas, demonstrou claramente que as miotoxinas isoladas neste trabalho são similares às miotoxinas previamente isoladas da peçonha da B. asper da Costa Rica. A Basp-I-PLA2 é uma nova fosfolipase A2 acídica isolada da peçonha de B. asper do Panamá e sua seqüência N-terminal revelou uma alta homologia com outras PLA2s acídicas Asp49 isoladas de peçonhas de serpentes
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 04.11.2009
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    How to cite
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    • ABNT

      RUEDA, Aristides Quintero; SOARES, Andreimar Martins. Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 isoladas da peçonha da serpente. 2009.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-27112009-175307/ >.
    • APA

      Rueda, A. Q., & Soares, A. M. (2009). Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 isoladas da peçonha da serpente. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-27112009-175307/
    • NLM

      Rueda AQ, Soares AM. Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 isoladas da peçonha da serpente [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-27112009-175307/
    • Vancouver

      Rueda AQ, Soares AM. Caracterização funcional e estrutural de fosfolipases A2 isoladas da peçonha da serpente [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-27112009-175307/

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