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Produção e uso de peptídeos recombinantes derivados do domínio III da proteína e dos Flavivirus Rocio, encefalite de Saint Louis e Oeste do Nilo (2010)

  • Authors:
  • Autor USP: CHAVEZ, JULIANA HELENA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: FLAVIVIRUS; VÍRUS DA ENCEFALITE; ELISA
  • Language: Português
  • Abstract: Os vírus da família Flaviridae e pertencentes ao gênero Flavivirus são arbovírus de grande importância em saúde pública, com altas taxas de morbidade e mortalidade em países tropicais. No Brasil é descrita a ocorrência de 11 flavivirus, sendo que 6 destes estão filogeneticamente relacionados ao Complexo da Encefalite Japonesa, responsável por infecções que podem acometer o sistema nervoso central causando encefalite. Dentre eles, destacam-se o vírus da Encefalite de Saint Louis (SLEV), recentemente isolado no estado de São Paulo e o vírus Rocio (ROCV), que foi responsável por um importante surto epidêmico no Vale do Ribeira, na década de 70. Além disso, outro vírus deste complexo que merece atenção é o Oeste do Nilo (West Nile WNV), introduzido nos Estados Unidos há 11 anos, tendo se espalhado por toda a América do Norte e migrado rumo sul, já ocorrendo evidências sorológicas da presença deste patógeno na Colômbia e na Argentina, o que aumenta o risco de sua introdução no Brasil. A provável introdução do WNV e a re-emergência das infecções cansadas pelo SLEV e ROCV sustentam a realização de estudos epidemiológicos e moleculares destes vírus visando à prevenção de futuros epidemias. Assim, o presente trabalho produziu polipeptídeos recombinantes contendo o domínio III, um dos principais sítios imunogênicos da proteína E destes vírus, através de técnicas de clonagem e expressão protéica procariótica. A amplificação do gene foi realizada por RTPCR, resultando em amplicons de cerca de 400 pb. Em seguida, foi realizada a clonagem dessa região no vetor pCR 2.1 e subclonagem nos vetores de expressão PQE31 e PQE32. A expressão protéica foi realizada em sistema procariótico com o uso da cepa M15 de E.coli, resultando em polipeptídeos de aproximadamente 17kd para cada vírus. A purificação protéica foi realizada através da estratégia de níquel ecauda de histidina em condições desnaturantes, e foi possível obter polipeptídeos com alto grau de pureza. Em seguida, os polipeptídeos produzidos foram utilizados como antígenos para a padronização do IgG-ELISA. Após esta padronização, foi possível avaliar 96 amostras de soro humano para a detecção de anticorpos contra esses vírus. Observou-se, uma alta prevalência de anticorpos anti-vírus da encefalite de Saint Louis (29%) e anti-vírus Rocio (27%) nos soros de pacientes com doença febril aguda. Ainda, foi possível a produção do peptídeo solúvel de rDIII, o qual foi utilizado para imunização de camundongos. Observou-se que o rDIII de ROCV ao ser administrado com adjuvante, foi imunogênico e gerou anticorpos em altos títulos para o ELISA padronizado com rDIII. Também estes anticorpos, reagiram de forma cruzada em menor intensidade com rDIII de SLEV e WNV. Desta forma, o presente trabalho permitiu a criação de uma ferramenta diagnóstica de grande valia e com vasta aplicabilidade em estudos de soroprevalência e epidemiologia de flavivirus circulantes no Brasil
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 07.05.2010

  • How to cite
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    • ABNT

      CHÁVEZ, Juliana Helena; FIGUEIREDO, Luiz Tadeu Moraes. Produção e uso de peptídeos recombinantes derivados do domínio III da proteína e dos Flavivirus Rocio, encefalite de Saint Louis e Oeste do Nilo. 2010.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010.
    • APA

      Chávez, J. H., & Figueiredo, L. T. M. (2010). Produção e uso de peptídeos recombinantes derivados do domínio III da proteína e dos Flavivirus Rocio, encefalite de Saint Louis e Oeste do Nilo. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Chávez JH, Figueiredo LTM. Produção e uso de peptídeos recombinantes derivados do domínio III da proteína e dos Flavivirus Rocio, encefalite de Saint Louis e Oeste do Nilo. 2010 ;
    • Vancouver

      Chávez JH, Figueiredo LTM. Produção e uso de peptídeos recombinantes derivados do domínio III da proteína e dos Flavivirus Rocio, encefalite de Saint Louis e Oeste do Nilo. 2010 ;

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