Investigação dos efeitos da expressão ectópica de spliced leader sobre a síntese e degradação protéica global em Leishmania major (2010)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, TIAGO RODRIGUES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: LEISHMANIA; METABOLISMO DE PROTEÍNA; VIRULÊNCIA; EXPRESSÃO GÊNICA
- Language: Português
- Abstract: A expressão gênica em Leishmania spp. é peculiar face aos demais eucariotos. A transcrição de seu genoma é policistrônica e gera pré-mRNAs que sofrem trans-splicing pela adição de um pequeno RNA nuclear de 39 nucleotídeos, o spliced leader (SL), à sequência 5' não-traduzida de cada mRNA maduro a ser gerado. Foi demonstrado anteriormente por Cruz e colaboradores que a expressão ectópica de um arranjo com 100 cópias do gene de SL RNA resulta na atenuação de virulência de L. major e L. braziliensis em modelo murino. Uma análise proteômica comparativa entre o transfectante de SL e a linhagem controle revelou a expressão diferencial de genes relacionados a proteólise e metabolismo energético. Os resultados obtidos até então resultaram na hipótese de que o acréscimo de SL disponível no mutante acarreta um aumento na geração de mRNAs maduros, e consequente aumento na síntese protéica global. Porém, o parasito seria capaz de manter a homeostase celular e de controlar, ainda que parcialmente, os níveis de proteínas por meio de vias proteolíticas. No trabalho aqui descrito foi analisada a relevância dos potenciais mecanismos proteolíticos utilizados pelo transfectante de SL para controlar o estresse molecular induzido artificialmente. O estudo baseou-se essencialmente em comparações experimentais entre os parasitas controle e os mutantes de SL. Foi evidenciado que o transfectante apresenta um incremento na sintese protéica por experimentas de incorporação de aminoácidos marcados e análise do perfil polissômico. A atividade proteolítica global mostrou-se elevada, assim como a atividade especifica mediada por cisteinopeptidases, mas não por metalopeptidases, como quantificado por meio de ensaios in nitro. Foi demonstrada uma intensa marcação de proteínas pela via ubiquitina-proteassoma, no transfectante de SL. Além das abordagens bioquímicas, foi realizada uma análisede perfil de expressão diferencial por hibridação em microarranjos de oligonucleotideos. Tal metodologia revelou 68 genes diferencialmente expressos entre os transfectantes, envolvendo funções moleculares relacionadas a tradução, proteólise, ligação a proteínas e ligação a ácidos nucléicos. Dentre esses genes, 15 foram avaliados por PCR em Tempo Real resultando na validação da expressão diferencial de 13 transcritos. Os dados encontrados reforçam o conceito de que a atenuação de virulência observada em Leishmania é, de fato, consequência de um conjunto complexo de mudanças em diversos processos celulares, ao contrário de alterações pontuais. A análise da modulação diferencial de vias celulares no transfectante pode direcionar novos estudos sobre expressão gênica e virulência nesses parasitosBiologia Celular e Molecular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 18.05.2010
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ABNT
FERREIRA, Tiago Rodrigues. Investigação dos efeitos da expressão ectópica de spliced leader sobre a síntese e degradação protéica global em Leishmania major. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. . Acesso em: 28 set. 2024. -
APA
Ferreira, T. R. (2010). Investigação dos efeitos da expressão ectópica de spliced leader sobre a síntese e degradação protéica global em Leishmania major (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Ferreira TR. Investigação dos efeitos da expressão ectópica de spliced leader sobre a síntese e degradação protéica global em Leishmania major. 2010 ;[citado 2024 set. 28 ] -
Vancouver
Ferreira TR. Investigação dos efeitos da expressão ectópica de spliced leader sobre a síntese e degradação protéica global em Leishmania major. 2010 ;[citado 2024 set. 28 ]
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