Desenvolvimento de bioprocessos com células S2 e CHO em biorreatores para produção de proteínas recombinantes (2010)
- Authors:
- Autor USP: VENTINI, DANIELLA CRISTINA - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: DROSOPHILA; CÉLULAS; GLICOPROTEÍNAS; VÍRUS; RAIVA; REATORES BIOQUÍMICOS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES
- Language: Português
- Abstract: Cultura de células animais vem sendo amplamente utilizadas para a produção de proteínas recombinantes devido a sua habilidade de realizar modificações pós-traducionais nas proteínas. Linhagens de células Drosophila melanogaster Schneider 2, expressando a glicoproteína G do vírus da raiva (GPV) com expressão sob controle de promotor constitutivo da Actina (Ac) e indutível da Metalotioneína (Mt) foram cultivadas em biorreator (1 L). As culturas foram realizadas a 90 rpm, temperatura 22 e 28 °C e oxigênio dissolvido (OD) a 10% e 50% de saturação com ar. O crescimento celular foi entre 1,0 e 3x107 cels/mL entre 4 e 5 dias de cultivo. As células Ac apresentaram GPV específica máxima (GPVemax) de 0,76 µg/107 cels em 4 dias de cultivo. As células Mt (com expressão induzida por CuSO4), apresentaram GPVemax entre 0,7 e 2 µg/107 cels entre 4 e 5 dias. Os resultados mostram influência da concentração de oxigênio dissolvido na expressão de GPV, aumentando a expressão específica nas células. Com OD a 10% de saturação com ar e 28 °C de temperatura obteve-se 2 µg/107 cels na linhagem Mt. Foram testados protocolos de armazenamento e lise das células além da extração da GPV da membrana celular, primeiro passo para purificação, objetivando o tratamento de altas concentrações celulares (aproximadamente 1010 cels). O congelamento de células em Tampão de Armazenamento contendo glicerol e inibidor de protease apresentou o melhor resultado. A lise celular por método mecânico associada à extração da proteína dos fragmentos de membrana com 0,2% Nonidet P-40 em 5 mL de Tampão de Extração, foi o melhor método para tratamento de até 109 células. Desenvolveu-se ainda um protocolo de bioprocesso em escala laboratorial de culturas de células de ovário de hamster chinês (CHO) aderidas a microcarregador Cytodex 1 em biorreator com volume de trabalho de 1 L, expressandohormônio estimulante da tireóide (TSH). Estas células foram cultivadas em meio de cultura suplementado com soro fetal bovino durante a fase de crescimento celular e, para a fase de síntese de TSH (produção), 75% v/v do sobrenadante foi substituído por meio sem soro a cada 24 horas. Os resultados mostram que a quantidade de microcarregador na cultura e a concentração celular para início da fase de produção de TSH são variáveis que influenciam no aumento da concentração final da proteína. A cultura de células CHO com, inicialmente, 4 cels/MC, 4 g/L de microcarregador, em batelada continuada, à 40 rpm, 37 °C, OD 20% de saturação com ar, pH 7,2 e início da produção com concentração celular de 3x106 cels/mL, manteve mais de 80% de microcarregadores confluentes por 5 dias e alcançou 9x106 cels /mL. Essas variáveis permitiram uma produção de 9,6 mg de TSH em 6,1 L.
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.05.2010
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ABNT
MONTEIRO, Daniella Cristina Ventini. Desenvolvimento de bioprocessos com células S2 e CHO em biorreatores para produção de proteínas recombinantes. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. . Acesso em: 31 mar. 2026. -
APA
Monteiro, D. C. V. (2010). Desenvolvimento de bioprocessos com células S2 e CHO em biorreatores para produção de proteínas recombinantes (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Monteiro DCV. Desenvolvimento de bioprocessos com células S2 e CHO em biorreatores para produção de proteínas recombinantes. 2010 ;[citado 2026 mar. 31 ] -
Vancouver
Monteiro DCV. Desenvolvimento de bioprocessos com células S2 e CHO em biorreatores para produção de proteínas recombinantes. 2010 ;[citado 2026 mar. 31 ] - Purificação e imunogenicidade da glicoproteína do vírus da raiva (RVGP) expressa pelos sistemas células S2 e Semliki Forest Virus
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