Produção, caracterização e aplicação analítica de anticorpos monoclonais anti-´βIND.2´-glicoproteína I (2010)
- Authors:
- Autor USP: STELLA, CAROLINA NIGRO - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Subjects: IMUNOLOGIA; ANTICORPOS MONOCLONAIS (PRODUÇÃO;CARACTERÍSTICAS;IMUNOLOGIA); IMUNOHISTOQUÍMICA (TESTES); GLICOPROTEÍNAS (METABOLISMO;IMUNOLOGIA)
- Language: Português
- Abstract: Anticorpos monoclonais (AcMo) anti-´βIND.2´GPI foram obtidos de hibridomas produzidos pela fusão de linfócitos de camundongos com células SP2-O, de mieloma murino. A imunização foi realizada com proteína purificada de plasma humano, por cromatografia de afinidade em resina Sepharose-Heparina 6 Fast Flow (GE Healthcare). Os AcMo produzidos pelos hibridomas ´KIND.2´57, ´KIND.2´II-3, ´KIND.2´33, ´KIND.2´2, ´KIND.2´37 e ´KIND.2´124 foram estudados quanto à sua capacidade de reconhecer o antígeno adsorvido em suporte sólido (dot-blot, imunoblot, ELISA direto) e em solução (ELISA indireto). Todos os clones foram cultivados e expandidos in vivo (ascite) e in vitro (cultura convencional). Pretende-se a substituição da expansão in vivo pela produção em biorreator. Os AcMo produzidos reconheceram a ´βIND.2´GPI em imunoblot com sensibilidade e especificidade variáveis. O desempenho dos AcMo ´KIND.2´2 e ´KIND.2´124 no reconhecimento da proteína adsorvida em placas de ELISA (Maxisorp, NUNC), mostrou-se promissor para o desenvolvimento de um teste ELISA direto (sanduíche), em substituição ao ELISA indireto (competição) atualmente utilizado. O AcMo ´KIN.2´2 mostrou reatividade semelhante à do anticorpo comercial 5F7 (ICN) em todos os testes realizados. Tanto o anticorpo produzido pelo clone ´KIND.2´2 quanto seus fragmentos Fab, obtidos através de digestão enzimática, foram utilizados para identificação e quantificação da proteína em plasma e tecidos de ratos submetidos a um modelo de sepse e translocação bacteriana. Os resultados obtidos demonstram que a modulação das concentrações plasmáticas de ´βIND.2´GPI e sua distribuição hepática dependem da intensidade e da via de infecção, e sugerem a presença de imunocomplexos da proteína in vivo
- Imprenta:
- Data da defesa: 26.03.2010
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ABNT
STELLA, Carolina Nigro. Produção, caracterização e aplicação analítica de anticorpos monoclonais anti-´βIND.2´-glicoproteína I. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-22042010-103017/. Acesso em: 17 abr. 2024. -
APA
Stella, C. N. (2010). Produção, caracterização e aplicação analítica de anticorpos monoclonais anti-´βIND.2´-glicoproteína I (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-22042010-103017/ -
NLM
Stella CN. Produção, caracterização e aplicação analítica de anticorpos monoclonais anti-´βIND.2´-glicoproteína I [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 17 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-22042010-103017/ -
Vancouver
Stella CN. Produção, caracterização e aplicação analítica de anticorpos monoclonais anti-´βIND.2´-glicoproteína I [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 17 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-22042010-103017/
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