ScFv's produzidos por Phage Display, específicos para a peçonha de Bothrops jararacussu, inibem ações tóxicas das peçonhas de Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni (2009)
- Authors:
- Autor USP: RONCOLATO, EDUARDO CROSARA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: SERPENTES; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; AGENTE TÓXICO; ANTICORPOS; IMUNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: O uso de antivenenos permanece como o principal tratamento dos acidentes ofídicos desde o final do século 19. A terapia clássica se baseia na administração de soros obtidos a partir do sangue coletado de eqüinos imunizados, contudo, gera o risco do desenvolvimento de doenças relacionadas à hipersensibilidade, além do elevado custo de produção e manutenção dos biotérios. Diante disso, buscam-se alternativas para a produção de antivenenos. Uma delas é a tecnologia de "Phage Display", que oferece a possibilidade da obtenção de fragmentos de anticorpos humanos recombinantes, específicos para as toxinas desejadas. Sua utilização, a princípio, eliminaria a necessidade de imunização animal e, por conseqüência, os inconvenientes do uso de soros heterólogos, reduzindo custos de produção e se adequando às normas do bem-estar animal. Partindo dessa técnica, Tamarozzi (Tamarozzi, Soares et al. 2006) selecionou, a partir da biblioteca de fagos-anticorpos Griffin.1 (MRC, Cambridge, UK), quatro clones produtores de scFv's capazes de inibir as atividades fosfolipásica e miotóxica da peçonha de Bothrops jararacussu. Sabendo da existência de similaridades estruturais entre as enzimas de ação tóxica das serpentes do Gênero Bothrops sp. (Gutierrez and Lomonte 1995), buscou-se avaliar a ação desses anticorpos citados, na inibição de atividades das peçonhas das Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni. Os clones referidos, expandidos como fagos-anticorpos que apresentam o fragmento do anticorpo em sua superfície, se mostraram capazes de reconhecer as peçonhas botrópicas em ensaio de ELISA. Os fragmentos de anticorpos solúveis, derivados dos fagos-anticorpos mencionados, foram utilizados em experimentos "in vitro" que avaliaram a inibição da atividade fosfolipásica das peçonhas botrópicas. Os sobrenadantes contendo os fragmentos solúveis foram capazesde inibir parte desta atividade, quando comparados à ação do sobrenadante de uma cultura controle. Alguns métodos foram testados buscando purificar os fragmentos de anticorpos recombinantes. Através das técnicas de gel filtração ou afinidade dos scFv's à proteína L, não foram obtidos resultados satisfatórios. A purificação foi realizada, com sucesso, a partir da interação da cauda de hexa-histidina dos scFv's ao íon níquel, ligado à uma resina de agarose. Os ensaios "in vitro", desta vez utilizando os fragmentos purificados, comprovaram sua função na inibição da atividade fosfolipásica das peçonhas botrópicas avaliadas. A partir destes ensaios, o clone que revelou maior eficiência nesta inibição foi selecionado dentre os quatro em questão. Os ensaios "in vivo" seguintes evidenciaram a capacidade deste clone em inibir também a miotoxicidade, além de retardar e em alguns casos, até mesmo evitar a letalidade decorrente da ação das peçonhas das Bothrops jararacussu, Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 18.12.2009
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ABNT
RONCOLATO, Eduardo Crosara. ScFv's produzidos por Phage Display, específicos para a peçonha de Bothrops jararacussu, inibem ações tóxicas das peçonhas de Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Roncolato, E. C. (2009). ScFv's produzidos por Phage Display, específicos para a peçonha de Bothrops jararacussu, inibem ações tóxicas das peçonhas de Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Roncolato EC. ScFv's produzidos por Phage Display, específicos para a peçonha de Bothrops jararacussu, inibem ações tóxicas das peçonhas de Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Roncolato EC. ScFv's produzidos por Phage Display, específicos para a peçonha de Bothrops jararacussu, inibem ações tóxicas das peçonhas de Bothrops jararaca, Bothrops pauloensis e Bothrops moojeni. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ]
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